[发明专利]产氢产乙酸细菌互营共培养体的分离筛选方法

摘要

产氢产乙酸细菌互营共培养体的分离筛选方法，它涉及一种细菌互营共培养体的分离筛选方法。它解决了现有产氢产乙酸细菌共培养体的分离筛选方法仅能筛选分离出来甲烷菌与产氢产乙酸细菌共培养体和硫酸盐还原菌与产氢产乙酸细菌共培养体两种产氢产乙酸细菌共培养体的问题。方法：一、将样品振荡；二、恒温振荡；三、将富集培养液接种并培养；四、制菌悬液A；五、将菌悬液A稀释后接种并培养；六、制菌悬液B；七、将菌悬液B稀释后接种并培养；八、重复步骤五到步骤七。本发明分离筛选出的细菌互营共培养体，经PCR-DGGE可知共培养体的DNA特征指纹图谱，并对条带切胶测序可知均为非产甲烷菌或硫酸盐还原菌与产氢产乙酸菌的互营共培养体。

主权项

1、产氢产乙酸细菌互营共培养体的分离筛选方法，其特征在于产氢产乙酸细菌互营共培养体的分离筛选方法按以下步骤实现：一、将具有完整甲烷发酵功能的厌氧活性污泥放入装有数颗玻璃珠的灭菌血清瓶中，通入氮气后封口，而后在温度为35℃、振荡速率为100～200r/min的条件下振荡处理1～3h；二、将经步骤一振荡培养后的厌氧活性污泥接种到装有富集培养基的灭菌血清瓶中，然后在温度为35℃、振荡速率为100～200r/min的条件恒温培养1～3个月；三、按接种量为10％～20％(V/V)将富集培养液接种到液体培养基上培养1～3个月；四、重复操作步骤三至液体培养基对富集培养液降解速率与甲烷产量达到稳定为止，得菌悬液A；五、在氮气环境中，取1mL菌悬液A用无菌厌氧水倍比稀释，然后将1mL经倍比稀释的菌悬液A接种于固体培养基上，而后在35℃的条件下恒温培养至固体培养基上有菌落出现；六、挑取单菌落放在液体培养基中，然后在温度为35℃、振荡速率为100～200r/min的条件恒温培养至有乙酸、甲烷、氢气和二氧化碳产生，得菌悬液B；七、取1mL菌悬液B用无菌厌氧水倍比稀释，然后将1mL经倍比稀释的菌悬液B接种于固体培养基上，而后在35℃的条件下恒温培养至固体培养基上有菌落出现；八、重复步骤六到步骤七25～30次，即可分离筛选出产氢产乙酸细菌互营共培养体。