[发明专利]海参肠道组织蛋白酶B的分离纯化方法有效
| 申请号： | 200910011892.4 | 申请日： | 2009-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN101565696A | 公开（公告）日： | 2009-10-28 |
| 发明（设计）人： | 朱蓓薇;周大勇;董秀萍;于蕾;孙黎明;吴海涛;宫国君;刘晶 | 申请（专利权）人： | 大连工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 | 代理人： | 贾汉生 |
| 地址： | 116034辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 海参肠道组织蛋白酶B的分离纯化方法，在4℃下用含L-Cys的醋酸钠缓冲液对海参肠匀浆破碎缓冲液浸提，采用硫酸铵分级沉淀，沉淀再用上述醋酸钠缓冲液溶解沉淀，透析除盐后浓缩得到组织蛋白酶B粗酶。将得到的组织蛋白酶B粗酶用离子交换层析色谱、凝胶色谱和高效液相色谱中的2～3种方法达到纯化的目的。 | ||
| 搜索关键词： | 海参 肠道 组织蛋白酶 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.海参肠道组织蛋白酶B的分离纯化方法，其特征在于操作步骤为：(1)海参处理取新鲜活海参，去体壁后将海参肠清洗，去除泥沙和杂质；(2)粗酶提取将其用1～20倍海参肠体积的0℃的含5～200mmol/L L-Cys(L-半胱氨酸)的5～200mmol/L pH 3.0～6.8的醋酸钠缓冲液匀浆破碎；在4℃下浸提4～18h，6000～20000×g冷冻离心5～60min，取上层清液用选择好的硫酸铵饱和度进行硫酸铵分级沉淀，后4℃下经6000～20000×g冷冻离心20～60min，取沉淀，并用上述醋酸钠缓冲液溶解沉淀，透析除盐后浓缩，即得到组织蛋白酶B粗酶；(3)酶的纯化将得到的组织蛋白酶B粗酶用离子交换层析色谱、凝胶色谱和高效液相色谱中的2～3种方法达到纯化的目的，其中离子交换层析色谱是必须使用的。
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