[发明专利]一种HBV病毒rtN236T突变的荧光扩增检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种HBV病毒rtN236T突变的荧光扩增检测试剂盒。本发明针对rtN236T变异(即236AAC/T→ACC/T突变)设计了一对引物和分别用两种荧光染料标记的一对特异性探针，在单管内使用双色荧光定量PCR技术实现了分别对野生株(rt236N)和突变株(rt236T)HBV DNA进行荧光扩增检测。本发明技术能快速的对HBV DNA rt236N和rt236T同时进行定性检测。

主权项

一种HBV病毒rtN236T突变的荧光扩增检测试剂盒，其特征在于包含一对特异性引物和一对特异性探针，扩增目标片段长度为132bp，引物序列为：引物1：5`-GTACAACATCTTGAGTCCCTTTT-3`(Seq No.1)引物2：5`-CCAACTTCCAATTACATATCCC-3`(Seq No.2)或者上述引物序列的互补序列，或者上述序列同源性大于75％的序列。设计的两条探针方向相反，除突变检测位点和3’端外(突变检测位点序列可互补，也可不互补，根据检测要求决定)其余区域基本互补；探针1和探针2的Tm值相近，同时也与两条引物的Tm值相近(相互间的差异均小于3℃)，两条探针的3’端除互补序列外均延伸2-4个碱基；探针1与rt236T基因序列互补，探针2与rt236N基因序列互补，分别用于检测变异株(rt236T)和野生株(rt236N)，探针序列为：探针1：5`-CATACATTTGACTCCTAACAAAACC-3`(Seq No.3)探针2：5`-TTGTTAGGGTTTAAATGTATGCC-3`(Seq No.4)或者上述引物序列的互补序列，或者上述序列同源性大于75％的序列。