[发明专利]一种厌氧活性污泥DNA的提取方法有效
| 申请号： | 200810064771.1 | 申请日： | 2008-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN101392248A | 公开（公告）日： | 2009-03-25 |
| 发明（设计）人： | 王爱杰;张运晴;阚洪静;刘充 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12P19/34;C07H1/06 |
| 代理公司： | 哈尔滨市松花江专利商标事务所 | 代理人： | 荣 玲 |
| 地址： | 150001黑龙江*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 一种厌氧活性污泥DNA的提取方法，它涉及活性污泥DNA的提取方法。本发明解决了现有提取厌氧活性污泥DNA的方法存在产量小、纯度低的缺陷。本发明提取厌氧活性污泥DNA的方法按照以下步骤进行：一、污泥清洗；二、裂解细胞；三、DNA的纯化；即提取出厌氧活性污泥DNA。本发明的DNA提取方法提取出的DNA纯度高、产量大。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 活性污泥 dna 提取 方法 | ||
【主权项】：
1、一种厌氧活性污泥DNA的提取方法，其特征在于提取厌氧活性污泥DNA的方法按如下步骤进行：一、污泥清洗：a、取2g的厌氧活性污泥加入1.5mL的离心管中，加入1mL的PBS缓冲液震荡，以9000r/min的速度离心1min；b、取离心下层污泥，重复步骤a两次，即得到清洗好的厌氧活性污泥；二、裂解细胞：取100mg清洗好的厌氧活性污泥放入1.5mL的离心管中，加入0.5g石英砂、40μLDNA提取缓冲液、20μL浓度为40mg/mL的RNA酶和160μL浓度为100mg/mL的溶菌酶，于37℃保温1h，并来回颠倒离心管20～30次，再加入400μLDNA提取缓冲液、40μL浓度为100mg/mL的蛋白酶K和600μLSDS缓冲液，于60℃保温1h，并来回颠倒离心管20～30次，以9000r/min的速度离心1min，取上清液加入另一个离心管中；三、DNA的纯化：向步骤二得到的上清液中加入上清液体积1/4的异丙醇，加入到离心吸附柱中，以9000r/min的速度离心15s，倒掉收集管中的液体，再以9000r/min的速度离心15s，在离心吸附柱中加入500μL质量浓度为75％的乙醇，静置1min，以9000r/min的速度离心30s后倒掉收集管中的液体，再将离心吸附柱放入同一收集管中，再加入500μL质量浓度为75％的乙醇，以9000r/min离心30s，倒掉收集管中的液体，将离心吸附柱再放入收集管中以9000r/min的速度离心1min，然后将离心吸附柱转移到新的收集管中，然后将100μL浓度为2mmol/L的Tris溶液加入到离心吸附柱中，在60℃的条件下保温5min，再以12000r/min的速度离心1min，即提取出厌氧活性污泥的DNA。
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