[发明专利]针对PCDH10C端蛋白片段分子的特异性抗体的制备方法无效
| 申请号： | 200810060201.5 | 申请日： | 2008-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN101255193A | 公开（公告）日： | 2008-09-03 |
| 发明（设计）人： | 朱永良 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C12N15/12;C12N15/62;C12N15/70;C07K19/00 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人： | 张法高 |
| 地址： | 310027*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种针对PCDH10 C端蛋白片段分子的特异性抗体的制备方法。采用聚合酶链式反应技术直接从体外培养细胞株中将PCDH10C 3’端碱基序列克隆至原核细胞，构建PCDH10 C端融合蛋白的原核细胞表达载体；建立PCDH10 C端融合蛋白的原核细胞表达系统，纯化PCDH10 C端融合蛋白；用纯化的PCDH10 C端融合蛋白作为抗原免疫大白兔，产生抗PCDH10 C端抗体；收集抗血清，亲和纯化，获得高纯度、高活性的兔抗PCDH10 C端蛋白特异性抗体。本发明制备的PCDH10 C端蛋白分子片段的特异性抗体是研究PCDH10介导信息通路转导的主要手段之一。PCDH10 C端蛋白分子片段特异性抗体表位是潜在的分子靶向治疗的靶点。PCDH10 C端蛋白分子片段的特异性抗体可用于临床评价肿瘤基因表达改变状况、转移潜能。 | ||
| 搜索关键词： | 针对 pcdh10c 蛋白 片段 分子 特异性 抗体 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种针对PCDH10C端蛋白片段分子的特异性抗体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1)采用聚合酶链式反应技术直接从体外培养细胞株中将PCDH10C 3’端碱基序列克隆至原核细胞，构建PCDH10C端融合蛋白的原核细胞PCDH10C/pET15b表达载体；2)将PCDH10C/pET15b表达载体转化BL21DE3pLysS大肠杆菌，建立PCDH10C端融合蛋白的原核细胞表达系统，用His金属螯和树脂纯化PCDH10C端融合蛋白，用Thrombin酶切除PCDH10C端融合蛋白N端的His-tag标签，得到PCDH10C端融合蛋白；3)用已切除标签的PCDH10C端融合蛋白作为抗原免疫大白兔，产生抗PCDH10C端抗体，收集抗血清，用硫酸铵沉淀、透析、Protein A-Sepharose亲和柱纯化兔抗PCDH10C端抗体。
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