[发明专利]基于泛蛋白修饰的α螺旋区的人工结合蛋白

摘要

本发明涉及用于生成源自泛蛋白样蛋白的蛋白超家族、在其α螺旋区具有修饰的结合蛋白的方法，以及通过所述方法可以获得的蛋白。此外，本发明提供蛋白用于特异性识别、结合和中和前述靶分子，用于检测、定量测定、分开和/或用于分离相应的结合配偶体的用途，和本发明蛋白用于诊断、预防和治疗所述相应的结合配偶体直接或间接参与其中的疾病的用途。

主权项

1.用于生成蛋白的方法，所述蛋白选自由“泛蛋白-样蛋白”蛋白超家族的蛋白、及其各具有泛蛋白-样折叠基序的片段或融合蛋白组成的组，其中所述蛋白由于对在α螺旋区中的一个或多个氨基酸的修饰而显示出关于试剂的提高的结合亲和性，所述结合亲和性在未修饰的蛋白质中不存在或不以该程度存在，所述方法具有下列步骤：a)选择“泛蛋白-样蛋白”超家族的未修饰蛋白；b)提供所述未修饰蛋白对其具有低的或不具有结合亲和性的试剂；c)选择在包括α螺旋区的蛋白质表面-暴露区中的氨基酸；d)优选地通过取代、插入、缺失和/或化学修饰而修饰所选择的氨基酸，其中所述α螺旋或相邻区域中的至少4个表面-暴露的氨基酸被修饰；e)使所述修饰的蛋白与步骤b)中提供的试剂相接触；f)检测和分离关于步骤b)中提供的试剂具有新或增高的结合亲和性的蛋白，和任选地进行下述步骤：g)在合适的原核、真核或体外表达系统中或通过化学合成生成所述修饰的蛋白；h)在生成后通过合适的纯化方法分离所述蛋白；和进一步任选地i)通过重复步骤d-h)进行所述修饰的蛋白的熟化。