[发明专利]一种法氏囊素三肽合成方法

摘要

一种法氏囊素三肽合成方法，合成方法按如下步骤进行：氨基酸保护→保护组氨酸－甘氨酸甲酯二肽合成→保护组氨酸－甘氨酸二肽的脱氨基保护→保护赖氨酸－组氨酸－甘氨酸的合成→保护赖氨酸－组氨酸－甘氨酸的脱氨基保护→法氏囊素三肽粗品的合成→法氏囊素三肽粗品的纯化，本发明的合成方法，可以大量合成制取高纯度的法氏囊素三肽，因而使BS的产量得到了提高，生产成本降低，同时具有重大的应用价值。

主权项

1、一种法氏囊素三肽合成方法，其特征在于：合成方法按如下步骤进行：氨基酸保护→保护组氨酸-甘氨酸甲酯二肽合成→保护组氨酸-甘氨酸二肽的脱氨基保护→保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成→保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的脱氨基保护→法氏囊素三肽粗品的合成→法氏囊素三肽粗品的纯化，其中(1)氨基酸保护a、将赖氨酸、组氨酸溶于NaOH中，置冰盐浴中冷却，搅拌下滴入预先用THF溶解的Z-Cl或Fmoc-Cl或(Boc)2O，同时滴入NaOH使溶液保持pH＝8～10。加完后自然升温至室温，继续搅拌0.5～2小时，然后，用乙醚洗2～3次，分去醚层，水相在搅拌下滴入盐酸使pH＝0.5～1.5，再加入乙酸乙酯，继续搅拌5～10分钟后分液，乙酸乙酯层用稀NaCl洗至中性、无水Na2SO4干燥、减压蒸馏除去乙酸乙酯溶剂，最后得到氨基保护赖氨酸Boc2-Lys或Fmoc2-Lys或Z2-Lys和氨基保护组氨酸Boc2-His或Fmoc2-His或Z2-His；b、将甘氨酸溶于甲醇中，置冰盐浴中冷却至-5～-10℃，缓慢滴入氯化亚砜，再加入浓硫酸，15～25℃温度下放置1.5～4小时，再在70～80℃水浴回流30～50分钟，然后，减压蒸馏除去甲醇后加入乙醚，0～4℃温度下放置1～2小时，待结晶完全后，过滤，再用无水乙醇洗涤结晶，最后得到GlyOCH3；(2)、保护组氨酸—甘氨酸二肽的合成取Boc2-His或Fmoc2-His或Z2-His溶解于水四氢呋喃中，用冰盐浴冷至-5～0℃，在搅拌过程中分别滴入预先用四氢呋喃溶解的HOSu和DCC或HOBt和DCC，滴完后在-5～0℃温度下反应20～60分钟，然后在-5～0℃温度下加入预先用DMF溶解的GlyOCH3及NMM，再在-5～0℃温度下反应20～60分钟，然后室温反应2～6小时，反应结束后，过滤，将滤液旋蒸至干，加入水和乙酸乙酯，然后转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤，并用无水Na2SO4干燥8～16小时、过滤、旋蒸出乙酸乙酯，最后得到为淡黄色粘稠液体的保护基2-His-GlyOCH3·HCl；(3)、脱氨基保护的组氨酸—甘氨酸二肽的合成；将上述淡黄色粘稠液体的保护基2-His-GlyOCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，最后得到His-GlyOCH3·HCl；(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成将His-GlyOCH3·HCl溶于适量的DMF中，并加入NMM，然后在-5～0℃温度下搅拌20～60分钟，得到待用化合物；将氨基保护赖氨酸Boc2-Lys或Fmoc2-Lys或Z2-Lys，用适量THF溶解，冰盐浴冷却至0～5℃，在该温度下滴加用THF溶解的DCC，HOSu或DCC，HOBt，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应2～4小时，然后滴入上述待用化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，继续搅拌反应20～60分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应24～48小时，待反应完毕后，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，再加入乙酸乙酯，然后转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层用乙酸乙酯萃取2～3次，合并有机层，分别用饱和柠檬酸、饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤，洗至pH＝6～7，有机层用无水Na2SO4干燥8～16小时、过滤、减压旋蒸出溶剂，最后得到保护基2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成将保护基2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌2～6小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-GlyOCH3·HCl；(6)、法氏囊素三肽粗品的合成将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0～5℃，通入干燥的NH3至溶液饱和，室温放置3天以上，然后将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，最后得到粗品；(7)、纯化将上述粗品用无水乙醇溶解，再过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，最后得纯度达95％以上的法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl。