[发明专利]能催化吲哚生成靛蓝的P450BM－3Glu 435Asp变体基因及其用途

摘要

本发明公开了一种能催化吲哚生成靛蓝的P450BM－3Glu435Asp变体基因及其用途。它通过易错PCR技术介导的随机突变，筛选获得的P450BM－3变体基因，该P450BM－3基因中的第435位的谷氨酸的密码子GAA突变为天冬氨酸的密码子GAT，所得到的P450BM－3变体基因(Glu⁴³⁵→Asp)P450BM－3该变体基因序列为SEQ ID No.1核苷酸序列，并且编码细胞色素P450BM－3的单加氧酶。能催化吲哚生成靛蓝的P450BM－3Glu435Asp变体基因，表达所得到P450BM－3变体蛋白酶能催化吲哚生成染料靛蓝。本发明创造了一种对吲哚具有更高催化活力的P450BM－3变体基因，其突变位点为Glu⁴³⁵→Asp，该变体基因表达的突变酶能构催化吲哚生成染料靛蓝，与R.D.Schmid领导的科研小组获得的具有三个突变位点的P450BM－3(Phe87Val，Leu188Gln，Ala74Gly)变体酶相比较，在测定的一例中活性提高了1.5－1.7倍，为生物转化生产染料靛蓝提供了广阔的应用前景。

主权项

1.一种能催化吲哚生成靛蓝的P450BM-3Glu435 Asp变体基因，其特征在于：通过易错PCR技术介导的随机突变，筛选获得的P450BM-3变体基因，该P450BM-3基因中的第435位的谷氨酸(Glu)的密码子GAA突变为天冬氨酸(Asp)的密码子GAT，所得到的P450BM-3变体基因(Glu435→Asp)P450BM-3该变体基因序列为SEQID No.1核苷酸序列，并且编码细胞色素P450BM-3的单加氧酶。