本发明属于抗体制备技术领域,尤其涉及抗人CD31兔单克隆抗体及其应用。所述抗人CD31兔单克隆抗体的轻链互补决定区1‑3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3‑5所示;重链互补决定区1‑3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.8‑10所示。本发明提供的兔单克隆抗体能够特异性识别和结合重组表达以及人血清或组织细胞表面的天然CD31蛋白,采用流式细胞分析检测时,与细胞表达的人CD31蛋白结合之后荧光跃迁良好,阳性信号强且单一,而且无非特异性结合,证实该抗体具有良好的特异性和高的亲和力,且对多种荧光都具有良好的适应性。