本发明提供了ENO1基因启动子区甲基化位点及其在制备早期诊断和预后评估食管癌的试剂盒中的应用,属于疾病诊断及预后评级技术领域;ENO1基因启动子区甲基化位点如SEQ ID No.1所示,提取食管鳞癌和癌旁正常样本组织DNA,经亚硫酸氢盐修饰后采用飞行质谱法检测ENO1基因启动子区CpG位点的甲基化频率,同时采用免疫组化检测食管鳞癌和癌旁正常组织样本中ENO1蛋白的表达;研究发现食管鳞癌中ENO1基因启动子区低甲基化且ENO1蛋白高表达,且其低甲基化的患者预后不良,ENO1可促进食管癌细胞的糖酵解水平,促进其增殖并抑制凋亡;检测ENO1基因的甲基化水平用于食管鳞癌的早期诊断和预后评价的试剂。