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[发明专利]敲除磷脂酶D基因的裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法和应用-CN202210986944.5在审
发明人：凌雪萍;李科燕;卢英华;崔潇文;陈翠雪 -专利权人：厦门大学
申请日： 2022-08-17 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明公开了敲除磷脂酶D基因的裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法和应用。本发明采用裂殖壶菌Schizochytrium limacinum SR21为原始菌株，通过基因工程手段在大肠杆菌中构建敲除载体，以PLD基因的上下游序列作为同源臂，以博来霉素基因替换PLD基因并作为筛选抗性基因，得到一株高产DHA的基因工程菌株，为基因工程调控裂殖壶菌高产DHA提供了新的思路。
磷脂酶基因裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法应用

[发明专利]产角鲨烯的裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法和应用-CN202110546695.3有效
发明人：凌雪萍;郑鑫;卢英华;姚传义;陈翠雪 -专利权人：厦门大学
申请日： 2021-05-19 - 公布日： 2023-02-28 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明公开了产角鲨烯的裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法和应用。本发明采用裂殖壶菌Schizochytrium limacinum SR21为野生型菌株，在大肠杆菌中构建以延长酶基因(elogase，elo1)两端序列为同源臂、博来霉素为筛选标记的elo1基因敲除载体pBlue‑ZEO‑elo1和以18sRNA为同源臂、潮霉素为筛选标记的磷脂酸磷酸酶基因(phosphatidic acid phosphatase，pap)干扰载体pBlue‑HYG‑siRNA‑18s，将两个载体同源重组结构域线性化后电转进入裂殖壶菌内，得到一株elo1基因敲除结合pap基因干扰的高产角鲨烯的裂殖壶菌基因工程菌株，命名为MIX菌株。本发明通过调控相关基因的表达水平改变了碳代谢流向，抑制了裂殖壶菌油脂合成的能力，为角鲨烯合成提供了更多的碳通量。本发明为裂殖壶菌实现多基因改造提供了理论依据，同时为裂殖壶菌生产角鲨烯奠定了实验基础。
产角鲨烯裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法应用

[发明专利]一种全合成培养基、制备方法及其用于三孢布拉氏霉菌的培养方法-CN202210768232.6在审
发明人：卢英华;陈翠雪;段然;陈婷婷 -专利权人：厦门大学
申请日： 2022-07-01 - 公布日： 2022-11-08 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种全合成培养基、制备方法及其用于三孢布拉氏霉菌的培养方法。该全合成培养基包括碳源、氮源、维生素、无机盐和增稠剂；其中，所述增稠剂为羧甲基纤维素钠1～15g/L，所述羧甲基纤维素钠同时作为碳源组分之一和三孢布拉氏霉无法快速降解的增稠剂，能够维持发酵液在一定粘度，通过其他组分的调配促进三孢布拉氏霉的生长，调节其菌丝形态和菌丝球形态，提高发酵体系对溶解氧的利用率。另外，本发明提供了一种基于此培养基对三孢布拉氏霉菌的培养方法，进行发酵培养和积累类胡萝卜素，使用补料的方式、结合菌体生长变化对发酵过程进行调控，使用合成酯类流加底物促进类胡萝卜素在三孢布拉氏霉中的积累。
一种合成培养基制备方法及其用于三孢布拉氏霉菌培养

[发明专利]一种以纤维素为碳源补料分批发酵生产L-色氨酸的方法-CN202210765718.4在审
发明人：邵文尧;王昱钧;卢英华;陈婷婷;陈翠雪 -专利权人：厦门大学
申请日： 2022-06-30 - 公布日： 2022-08-30 - 主分类号： C12P13/22 文献下载
摘要：一种以纤维素为碳源补料分批发酵生产L‑色氨酸的方法，包括以下步骤：1)色氨酸生产菌株的扩大培养阶段：在摇瓶中添加种子培养基，将菌株接种至摇瓶内进行扩大培养；2)补料分批发酵阶段：摇瓶中添加含有纤维素的发酵培养基，将步骤1)中扩大培养后的种子接种至摇瓶，然后在摇瓶内加入纤维素酶粗酶液，纤维素酶粗酶液与发酵培养基中所含的纤维素组分持续反应，为发酵体系提供还原糖作为补料碳源。
一种纤维素碳源分批发酵生产色氨酸方法

[发明专利]用CRISPR-Cas9技术构建的重组大肠杆菌及其在制备磷脂酶D中的应用-CN202210574619.8在审
发明人：凌雪萍;陈少锋;卢英华;姚传义;陈翠雪;赵旭蕊 -专利权人：厦门大学
申请日： 2022-05-25 - 公布日： 2022-08-19 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了用CRISPR‑Cas9技术构建的重组大肠杆菌及其在制备磷脂酶D中的应用。本发明涵盖敲除三个海藻糖酶基因treA、treC及treF构建耐盐菌株和磷脂酶D表达菌株及优化磷脂酶D表达条件两部分。所述磷脂酶D表达菌株构建采用质粒pBADKP‑pld2，优化表达条件包含诱导条件优化、培养基优化、氯化钠及氯化镁胁迫。在优选的表达条件下，一方面获得高水平磷脂酶D产量，另一方面极大地减少了磷脂酶D的细胞泄露问题，维持细胞的表达活性。本发明能实现短时间内磷脂酶D高表达，具有优良的时空产率。
crispr cas9 技术构建重组大肠杆菌及其制备磷脂酶中的应用

[发明专利]添加绿色溶剂加速脂肪酶催化合成维生素C棕榈酸酯的工艺-CN202210634023.2在审
发明人：卢英华;齐书华;姚传义;凌雪萍;孟一真;陈翠雪 -专利权人：厦门大学
申请日： 2022-06-06 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C12P17/04 文献下载
摘要：添加绿色溶剂加速脂肪酶催化合成维生素C棕榈酸酯的工艺，在有机溶剂中利用固定化脂肪酶B催化维生素C与棕榈酸酯化合成维生素C棕榈酸酯是一条有效的路线，但维生素C在许多有机溶剂中溶解度过低限制该工艺的成功应用。本发明通过一定含量的环境友好型绿色溶剂DMI提高维生素C的溶解度，加快了反应速度，显著缩短了反应时间，最终转化率≥95％。
添加绿色溶剂加速脂肪酶催化合成维生素棕榈工艺

[发明专利]一种提高盐生杜氏藻产油能力的驯化方法-CN201811305001.1有效
发明人：凌雪萍;段然;卢英华;周芯羽;郭晓昀;陈翠雪 -专利权人：厦门大学
申请日： 2018-11-02 - 公布日： 2022-06-21 - 主分类号： C12N1/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高盐生杜氏藻产油能力的驯化方法。本发明首先通过在开始时添加乙酰辅酶A羧化酶抑制剂，确定进行驯化的浓度范围，之后选择适宜的抑制剂浓度对藻种进行多次驯化和传代，对藻种的生物量和产油能力进行测定，对藻种的遗传稳定性进行评估，选育出了产油能力高的盐生杜氏藻种。
一种提高盐生杜氏藻产油能力驯化方法

[发明专利]一种支链含醚键单体改性软质疏水丙烯酸酯共聚物及制备与应用-CN202210045709.8在审
发明人：卢英华;赵博群;邵文尧;陈翠雪 -专利权人：厦门大学
申请日： 2022-01-14 - 公布日： 2022-04-26 - 主分类号： C08F220/18 文献下载
摘要：一种支链含醚键单体改性软质疏水丙烯酸酯共聚物及制备与应用，所述共聚物的玻璃化转变温度低于25℃，形变大于100％，在可见光范围内有着超过90％的透射率和不低于1.51的折射率，同时较一般软质疏水材料，在降低表面水接触角的同时保持较低含水率，表现出优异的眼内透镜材料性能。
一种支链含醚键单体改性疏水丙烯酸酯共聚物制备应用

[发明专利]一种用重组短芽孢杆菌生产磷脂酶D的方法-CN201910572985.8有效
发明人：凌雪萍;罗唯一;卢英华;张学良;熊维德;姚传义;陈翠雪 -专利权人：厦门大学
申请日： 2019-06-27 - 公布日： 2021-04-27 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种用重组短芽孢杆菌生产磷脂酶D的方法，以含有来源于Streptomyces antibioticus的PLD基因序列的质粒pUC57‑PLD anti为模板，扩增PLD基因；将PLD基因与载体PNCMO2连接得到质粒PNCMO2/PLD，然后转化进E.coli保存；随后从E.coli中提取质粒PNCMO2/PLD转化进B.choshinensis得到重组菌B.choshinensis/PNCMO2‑PLD，然后发酵培养，胞外表达PLD。本发明中的重组质粒稳定，细胞毒性小，可实现高密度胞外表达磷脂酶D。
一种重组芽孢杆菌生产磷脂酶方法

[发明专利]三区带异步切换模拟移动床分离吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法-CN201910707958.7有效
发明人：姚传义;涂志贤;凌雪萍;敬科举;陈翠雪;卢英华;范恩国 -专利权人：厦门大学
申请日： 2019-08-01 - 公布日： 2021-02-19 - 主分类号： C07D471/14 文献下载
摘要：三区带异步切换模拟移动床分离吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，涉及吴茱萸碱和吴茱萸次碱分离的技术领域。将吴茱萸碱和吴茱萸次碱样品与甲醇水溶液混合得到进样溶液，以十八烷基硅烷键合的球形硅胶C18为固定相，甲醇水溶液为流动相，将进样溶液经过三区带异步切换模拟移动床进行分离，得到高纯度的单一吴茱萸碱和吴茱萸次碱；具有产量高，连续化、自动化生产等优点，是一种极具商业化的生产模式。
三区带异步切换模拟移动分离吴茱萸方法

[发明专利]一种重组大肠杆菌生产磷脂酶D的方法-CN201810843255.2有效
发明人：卢英华;熊维德;曾宪海;姚传义;沈亮;陈翠雪 -专利权人：厦门大学
申请日： 2018-07-27 - 公布日： 2020-12-04 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组大肠杆菌生产磷脂酶D的方法，将磷脂酶D基因置于严谨型启动子控制下，在表达质粒中插入pSC101的par区域，同时使用大肠杆菌recA突变株保持质粒的遗传稳定，生长期富集含质粒的细胞培养至高密度，诱导期饱和诱导，同时降低温度和施加碱金属盐胁迫，缓解PLD对宿主的细胞毒性，抑制细胞裂解，延长PLD的合成时间，从而提高PLD的表达。
一种重组大肠杆菌生产磷脂酶方法

[发明专利]一种过表达角鲨烯合成酶基因的裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法和应用-CN202010623200.8在审
发明人：凌雪萍;杨庆华;张学良;周豪;卢英华;陈翠雪 -专利权人：厦门大学
申请日： 2020-06-30 - 公布日： 2020-11-06 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明公开了一种过表达角鲨烯合成酶基因的裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法和应用。本发明采用裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)ATCC1381为原始菌株，通过基因工程手段在大肠杆菌中构建过表达载体，选择博莱霉素作为筛选抗性基因，真核生物的高保守序列18S rRNA作为同源臂，将线性化的过表达片段电转进入裂殖壶菌内，得到一株高产角鲨烯的基因工程菌株，为微生物生产角鲨烯以及产品工业化奠定了理论基础。
一种表达角鲨烯合成基因裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法应用

[发明专利]一种分离纯化大肠杆菌重组磷脂酶D的方法-CN201810846519.X有效
发明人：卢英华;熊维德;曾宪海;姚传义;沈亮;陈翠雪 -专利权人：厦门大学
申请日： 2018-07-27 - 公布日： 2020-10-27 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种分离纯化大肠杆菌重组磷脂酶D的方法，将带有组氨酸纯化标签的重组磷脂酶D表达在大肠杆菌周质空间中，通过脱氧胆酸钠和EDTA的提取液提取后，经二步硫酸铵沉淀和打浆，阴离子交换层析和Ni2+柱亲和层析纯化得到电泳级纯度磷脂酶D。
一种分离纯化大肠杆菌重组磷脂酶方法

[发明专利]一种提高裂殖壶菌中EPA含量的调控方法与应用-CN201810602177.7有效
发明人：凌雪萍;李俊;卢英华;何宁;李娜;陈翠雪;潘雪珊 -专利权人：厦门大学
申请日： 2018-06-12 - 公布日： 2020-10-16 - 主分类号： C12P7/64 文献下载
摘要：一种提高裂殖壶菌中EPA含量的调控方法与应用，涉及海洋微生物。将菌株Schizochytrium sp.MYA1381经过平板和二级种子活化，制备种子液，再接种于发酵培养基，在裂殖壶菌生长的不同阶段加入氟啶酮。所述氟啶酮可在提高裂殖壶菌EPA含量中应用。首次将氟啶酮应用到脂肪酸合成途径的调控中，为提高裂殖壶菌中EPA含量提供了新的思路。通过添加氟啶酮，显著提高了裂殖壶菌油脂中EPA的含量，相比于未添加提高了42.31％。为使用氟啶酮提高裂殖壶菌内EPA含量提供了基础。
一种提高裂殖壶菌中 epa 含量调控方法应用

[发明专利]一种利用二甲亚砜冷冻保藏雨生红球藻的方法-CN201911087387.8在审
发明人：凌雪萍;杨庆华;段然;卢英华;姚琼霞;陈翠雪 -专利权人：厦门大学
申请日： 2019-11-08 - 公布日： 2020-04-10 - 主分类号： C12N1/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用二甲亚砜冷冻保藏雨生红球藻的方法，使用二甲亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂对雨生红球藻进行冷冻保藏，选取特定生长阶段的藻体，并通过一系列降温操作作为冷冻保藏的前置过程。结果表明，本发明方法能够使藻体细胞质玻璃化，提高藻体抗冻能力，并有效提高藻种复苏率，在冷冻保藏1年时，藻体复苏率可达61.5％。
一种利用二甲亚砜冷冻保藏雨生红球藻方法

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