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[发明专利]维持干细胞自我更新的6个猪源关键基因的体外转录质粒的构建-CN201010182404.9无效
发明人：欧阳红生;唐小春;逄大欣;周杨;朱建国;赖良学;陈月;段新平;张明军 -专利权人：吉林大学
申请日： 2010-05-26 - 公布日： 2011-03-09 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明涉及一种维持干细胞自我更新的6个猪源关键基因的体外转录质粒构建，其特征在于具体制备方法如下：首先设计基因体外转录空载体Vitro-TransPMD-18T，然后获得EGFP和维持干细胞自我更新的猪源的6个关键基因的cDNA，并按相应的酶切位点进行酶切连接，最后用体外转录试剂盒对7个体外转录质粒进行体外转录，得到相应的mRNA，然后将Vitro-Trans-EGFP转染进猪胚胎成纤维细胞：其6个基因体外转录出的mRNA转染进猪胚胎成纤维细胞后能够使其转变成猪的多能干细胞；6个基因体外转录出的mRNA能够高效翻译。
维持干细胞自我更新个猪源关键基因体外转录质粒构建

[发明专利]稳定表达植物甜味蛋白基因的哺乳动物细胞系及构建方法-CN201010292842.0无效
发明人：赖良学;闫森;欧阳红生;逄大欣;李莉;李小平;高飞;王海军;宋娜;周杨 -专利权人：吉林大学
申请日： 2010-09-27 - 公布日： 2011-02-23 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种植物甜味蛋白基因稳定表达哺乳动物细胞系及构建方法，将构建的pCAG-neo-Thauamtin载体线性化后，利用脂质体LipofectamineTM2000转染HEK-293细胞，经G418压力筛选10天后，获得抗性细胞。采用一系列的方法对所获得的细胞在基因水平、转录水平和翻译表达水平进行鉴定，获得了稳定表达Thauamtin基因的HEK-293细胞系，利用RT-PCR、Westernblot在哺乳动物细胞水平上检测了植物甜味蛋白Thaumatin基因的表达。
稳定表达植物甜味蛋白基因哺乳动物细胞系构建方法

[发明专利]表达猪源Cre重组酶载体pCEP4-Cre的构建-CN201010185086.1无效
发明人： 逄大欣;周杨;欧阳红生;朱建国;张明军;王铁东;李莉;聂代邦;段新平;毛丹 -专利权人：吉林大学
申请日： 2010-05-28 - 公布日： 2010-11-24 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明涉及一种表达猪源Cre重组酶载体pCEP4-Cre的构建，其特征在于：首先采用基因工程的方法构建pCEP4-Cre质粒，并用载体pCEP4-Cre与载体pEF-stop-eGFP共转染进入细胞，在表达Cre重组酶的情况下，将转入到细胞中的载体pEF-stop-eGFP中的Loxp卯定的终止子删除，使后接的报告基因eGFP得以表达，从而用于剪切条件性表达绿色荧光蛋白载体中的LoxP元件；其应用基因工程技术构建了一个表达Cre重组酶的质粒，并且重组质粒pCEP4-Cre可以在药物压力下独立于细胞染色体外存在，并在撤去药物压力后以每代10％的速率丢失；可有效的防止细胞基因组因插入外源基因而导致的基因突变；其使用的简便性和安全性可被广泛的应用，为人类Cre重组酶系统的检测发展起到积极的推动作用。
表达 cre 重组载体 pcep4 构建

[发明专利]饲料中牛羊源成分检测方法及试剂盒-CN200910218081.1无效
发明人： 逄大欣;欧阳红生;郑文文;李小平;高飞;王铁东;任林柱;李莉;张明军;张英 -专利权人：吉林大学
申请日： 2009-12-23 - 公布日： 2010-07-14 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供一种饲料中牛羊源成分检测试剂盒，同时还提供了相应的试剂盒，用于牲畜饲料中牛羊源成分检测。本发明建立一种快速、灵敏、准确率高，适用于饲料中牛羊源成分检测的实时荧光定量PCR体系。
饲料牛羊成分检测方法试剂盒

[发明专利]双温多重PCR鉴定猪早期胚胎性别的方法及试剂盒-CN200910217772.X无效
发明人：欧阳红生;李小平;逄大欣;高飞;闫森;赖良学;王铁东;李莉;于浩 -专利权人：吉林大学
申请日： 2009-10-28 - 公布日： 2010-06-09 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明一种双温多重PCR鉴定猪早期胚胎性别的方法及试剂盒，建立一种快速、灵敏、准确率高的适用于猪早期胚胎性别鉴定的双温多重PCR反应体系，用于猪早期胚胎的性别鉴定。以双温多重PCR技术体系开发的猪早期胚胎性别鉴定试剂盒，充分发挥了双温多重PCR高效、经济简便、省时、反应特异性高的特点，实现快速鉴定猪早期胚胎从而为实现猪性别控制，提高猪养殖业经济效益，节约养殖成本提供便利。
多重 pcr 鉴定早期胚胎性别方法试剂盒

[发明专利]一种用于制备人类疾病动物模型的转基因猪及其培育方法-CN200910066584.1无效
发明人：欧阳洪生;逄大欣;陈立梅;李莉;李占军;王铁东;张明军;任林柱;闫森;宋娜 -专利权人：吉林大学
申请日： 2009-03-04 - 公布日： 2009-11-04 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供一种用于制备人类疾病动物模型的转基因猪及其培养方法，采用基因工程的方法构建诱导性表达Cre重组酶表达载体pET28a-Mxl-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR，用干扰素诱导剂聚肌胞(polyI：C)进行诱导后能够表达Cre重组酶，从而用于敲除靶基因；通过细胞转染及细胞筛选技术筛选出可以诱导性表达Cre重组酶的猪成纤维细胞；利用体细胞核移植技术进行克隆猪。该克隆猪可用于制备人类疾病的基因敲除的动物模型。
一种用于制备人类疾病动物模型转基因及其培育方法

[发明专利]检测Cre位点特异重组酶活性的转基因报告猪及培养方法-CN200910066596.4无效
发明人：欧阳红生;逄大欣;李莉;王铁东;陈立梅;赖良学;任林柱;张明军;李占军 -专利权人：吉林大学
申请日： 2009-02-28 - 公布日： 2009-10-07 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供一种检测Cre位点特异重组酶活性的转基因报告猪及培养方法，采用基因工程的方法构建LoxP位点锚定终止子，后接报告基因的打靶载体，当Cre重组酶存在的情况下，将Loxp锚定的终止子删除，使后接的报告基因得以表达，从而用于监测Cre重组酶的活性；通过细胞转染及细胞筛选技术筛选出可以特异性检测Cre活性的成纤维细胞；利用体核移植技术进行克隆猪。用于在体内监测Cre重组酶的活性，为建立人类疾病模型提供了监测工具，解决了目前转基因克隆猪的技术不成熟，克隆效率较低问题。
检测 cre 特异重组活性转基因报告培养方法