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[发明专利]基于导航型DNA步行器和荧光调控机制的金黄色葡萄球菌荧光检测方法-CN202310200049.0在审
发明人：李新章;蔡蓉凤;周楠迪 -专利权人：南通凯恒生物科技发展有限公司
申请日： 2023-03-06 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明涉及基于导航型DNA步行器和荧光调控机制的金黄色葡萄球菌荧光检测方法，通过核酸外切酶I和核酸外切酶III的双酶识别反应体系对有/无金黄色葡萄球菌的样品进行识别和区分。含有金黄色葡萄球菌的样品在双酶识别反应体系中产生有效燃料链，引发DNA步行器沿着运动轨道发生位移，进一步触发荧光共振能量转移，最终获得与目标浓度相关的放大荧光信号；根据荧光强度与金黄色葡萄球菌浓度之间的关系测定污染样品中金黄色葡萄球菌的浓度。本发明提高了DNA步行器的可控性和运动效率，降低脱轨和中断的风险。在9‑90CFU·mL‑1的检测范围内定量检测的准确率达到100％，检测的重现性和回收率达到98％以上，可以检测到含2CFU·mL‑1的金黄色葡萄葡萄糖球菌的样品。
基于导航 dna 步行荧光调控机制金黄色葡萄球菌检测方法

[发明专利]一种检测金黄色葡萄球菌的电化学方法-CN201910710468.2有效
发明人：周楠迪;蔡蓉凤;张钟文;田亚平 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-08-02 - 公布日： 2022-08-12 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：一种检测金黄色葡萄球菌的电化学方法，属于分析化学及环境污染检测技术领域。本发明采用具有特殊切割位点的切刻内切酶Nb.bpu10I和强链置换效应的Bsm DNA聚合酶通过链置换扩增反应获得大量单链DNA扩增序列。将扩增序列加入到电极系统中，与MB序列完全互补，打开三链结构，使G四链体电化学信号释放。通过电化学信号与金黄色葡萄球菌数量的关联，实现了对湖水中的金黄色葡萄球菌的数量检测。本发明方法具有回收率高，灵敏度高，特异性强等优点。
一种检测金黄色葡萄球菌电化学方法

[发明专利]一种基于嵌合体序列设计和分子信标的荧光检测金黄色葡萄球菌的方法-CN201811266618.7有效
发明人：周楠迪;蔡蓉凤;尹凡;田亚平 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-10-29 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：一种基于嵌合体序列设计和分子信标的荧光检测金黄色葡萄球菌的方法，属于分析化学、食品安全和发酵分析及环境污染检测领域。本发明首先设计了一条以发夹结构存在并包含金黄色葡萄球菌适配体的嵌合体序列，有金黄色葡萄球菌存在时，嵌合体与之结合打开发夹结构；将Nb.bpu10I切刻内切酶和Bsm DNA聚合酶加入到反应体系中，Bsm DNA聚合酶通过强链置换反应合成完全互补的双链；利用荧光信号与金黄色葡萄球菌的数量间的线性关系可计算样品中的金黄色葡萄球菌含量。本发明放大了荧光信号，使该传感器检测范围扩大，提高检测灵敏度。该方法相比于检测金黄色葡萄球菌的传统方法，特异性强，灵敏度高。
一种基于嵌合体序列设计分子标的荧光检测金黄色葡萄球菌方法

[发明专利]一种基于适配体和链置换扩增反应对金黄色葡萄球菌的测定方法-CN201811121430.3有效
发明人：周楠迪;蔡蓉凤;尹凡;田亚平 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-09-26 - 公布日： 2021-11-12 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：一种基于适配体和链置换扩增反应对金黄色葡萄球菌的测定方法，属于分析化学及食品安全和发酵分析技术领域。本发明首先构建靶标识别体系，通过金黄色葡萄球菌与适配体之间的高度亲和力，可从双链中竞争释放cDNA；然后以cDNA为模板，在溶液中加入触发引物序列，扩增出大量具有特定序列的单链DNA；加入特定发夹结构后，单链DNA与发夹结构在溶液中自组装形成特定的六边形结构；最后加入荧光染料，染料与DNA双链特异性结合，释放荧光信号。利用荧光信号与金黄色葡萄球菌数量的线性关系来计算出样品中的金黄色葡萄球菌含量。本发明通过荧光共振能量转移原理，将荧光信号与金黄色葡萄球菌数量关联，实现了对牛奶等食物样品中金黄色葡萄球菌含量的直接测定。所建立的检测方法具有检测周期短，灵敏度高，成本低，特异性强等特点。
一种基于适配体置换扩增应对金黄色葡萄球菌测定方法

[发明专利]基于DNA步行器和纳米花结构的致病菌电化学检测方法-CN202011429143.6有效
发明人：周楠迪;蔡蓉凤;田亚平 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-12-09 - 公布日： 2021-11-02 - 主分类号： G01N27/26 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于DNA步行器和纳米花结构的致病菌电化学检测方法，属于检测技术领域。本发明通过在电极表面修饰DNA步行器，当目标物存在时释放大量游离滚环扩增引物，随后的滚环扩增反应诱导DNA纳米花的形成，增大电极表面有效面积，放大检测信号，有效提高检测灵敏度。而当溶液中不存在目标物时，DNA步行器在核酸外切酶III的诱导下水解滚环扩增引物，降低背景信号，拓宽传感器的检测范围。
基于 dna 步行纳米结构致病菌电化学检测方法

[发明专利]一种批量化对酒类样品中氨基甲酸乙酯快速测定的方法-CN201710546430.7有效
发明人：周楠迪;张智威;蔡蓉凤;田亚平 -专利权人：江南大学
申请日： 2017-07-06 - 公布日： 2019-06-18 - 主分类号： G01N27/26 文献下载
摘要：一种批量化对酒类样品中氨基甲酸乙酯快速测定的方法，属于分析化学和食品安全检测技术领域。本发明首先利用EC专用固相柱对酒类样品进行前处理萃取出其中的EC；然后在萃取所得溶液体系中加EC降解酶；最后往检测体系中加入底物丙酮酸钠和NADH并用缓冲液调节pH，利用AlaDH修饰的丝网印刷电极进行电化学检测，利用电流‑时间法测定NADH消耗造成的电流响应值下降与EC浓度的线性关系来测算出EC含量。本发明构建了一个基于酶修饰丝网印刷电极的EC传感器，通过与EC萃取专用固相柱的联用，有效排除了酒类基质中主要干扰物尿素的影响，实现了对黄酒等酒类样品中EC含量的直接测定。该方法比之目前EC测定的主流方法GC‑MS，不需要大型仪器设备，且能实现快速、高灵敏、低成本地批量化测定。
一种批量酒类样品氨基甲酸快速测定方法