本发明公开了一种基于RAA‑CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法,其包括以下步骤:以样本中的核酸作为模板进行RAA扩增,RAA扩增引物选自C10L、F5L、E3L、D3R、A21L中任一基因,其上游引物序列依次如SEQ ID NO.1‑5所示,其下游引物序列依次如SEQ ID NO.6‑10所示;使用RAA扩增产物,Cas12a蛋白,crRNA,荧光标记的ssDNA在CRISPR‑Cas12a系统检测体系里反应;对上述反应体系进行荧光强度的检测。本发明方法灵敏度为2.5拷贝/反应,且与鼠痘病毒、痘苗病毒无交叉反应,具有高特异性,为高效、快速、特异性检测猴痘病毒感染提供了有力工具。