本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种中性蛋白酶基因、中性蛋白酶及其制备方法和应用。本发明中性蛋白酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明通过将中性蛋白酶Np的第422位氨基酸和第433位氨基酸突变为半胱氨酸，可以形成二硫键，使所得中性蛋白酶的热稳定性得到显著提升，具有更广泛的应用前景。
本发明属于酶工程领域，具体涉及一种几丁质酶突变体ChiM‑SS及其应用。本发明提供的几丁质酶突变体ChiM‑SS是以几丁质酶ChiM为出发模板，通过理性设计二硫键突变体以及组合突变获得热稳定性提升的突变体ChiM‑SS，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明突变体ChiM‑SS在60℃、65℃和70℃热处理60分钟后的剩余酶活分别为59.6%、45.8%和33.2%，分别是出发模板ChiM的2.71倍，5.1倍和4.7倍。本发明通过结合基因拷贝数、分子伴侣共表达，以毕赤酵母为重组表达宿主，实现突变体ChiM‑SS的高效表达，可用于制备突变体ChiM‑SS，进一步为其广泛应用奠定基础。
本发明属于分子生物学领域，特别涉及一种壳聚糖酶Csncv及其突变体CsnB和应用，其中突变体CsnB通过优化密码子后的壳聚糖酶Csncv突变得到，优化的壳聚糖酶Csncv氨基酸序列和核苷酸序列如SEQ ID NO.16‑17所示，突变体CsnB的氨基酸序列和核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑14所示，通过构建CsnB的高效表达工程菌，提高了壳聚糖酶的热稳定性，水解壳聚糖得到含有壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖和壳六糖的壳寡糖产物；本发明获得的壳聚糖酶Csncv及其突变体CsnB能够应用于壳寡糖的制备和医药、农业、食品等行业，为壳聚糖酶产业化应用奠定基础。
本发明属于分子生物学以及酶工程领域，具体涉及一种壳聚糖酶突变体CsnBa1及其应用。本发明公开了一种热稳定性提高的突变体CsnBa1及其酶学特性。以前期获得的壳聚糖酶CsnBaa为模板，通过二硫键以及糖基化突变获得热稳定性提升的突变体，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明获得的壳聚糖酶突变体CsnBa1，在45℃到55℃范围内具有良好的稳定性，热处理30分钟后剩余酶活均大于80%，在60℃热处理30分钟后，剩余酶活为41.2%，为壳聚糖酶CsnBaa剩余酶活约17.8%的2.3倍，可用于制备重组载体、重组菌株。本发明获得的壳聚糖酶突变体CsnBa1具有良好的热稳定性，可用于壳寡糖制备领域，并进一步为其广泛应用奠定基础。
本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种壳聚糖酶突变体CsnT及其应用。本发明提供的壳聚糖酶突变体CsnT是以壳聚糖酶Csnbm为出发模板，通过增加二硫键获得突变体CsnT，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明获得的壳聚糖酶突变体CsnT，在55℃、60℃以及65℃热处理30分钟后的酶活保留率分别为Csnbm的4.46倍、6.4倍和7.5倍，可用于制备重组载体、重组菌株。本发明获得的壳聚糖酶突变体CsnT具有良好的热稳定性，可用于壳寡糖制备领域，并进一步为其广泛应用奠定基础。
本发明属于酶工程领域，具体涉及一种酶比活提升的几丁质酶突变体ChiM及其应用。本发明提供的几丁质酶突变体ChiM是以几丁质酶ChiAm为出发模板，通过定点包含突变、组合突变获得酶比活提升的突变体ChiM，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明获得的几丁质酶突变体ChiM酶比活为71U/mg，是ChiAm的1.48倍。本发明以毕赤酵母为重组表达宿主，实现了ChiM的高效表达，可用于制备突变体ChiM，为进一步为其广泛应用奠定基础。
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种几丁质脱乙酰酶基因、几丁质脱乙酰酶及其制备方法和应用。本发明几丁质脱乙酰酶基因cdaba的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于萎缩芽孢杆菌Bacillus atrophaeus几丁质脱乙酰酶的序列进行综合优化得到。本发明几丁质脱乙酰酶CdaBa的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了几丁质脱乙酰酶的种类和来源途径，而且酶比活可达352U/mg，在较宽的温度范围和较宽的pH范围内均表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种几丁质酶基因、几丁质酶及其制备方法和应用。本发明几丁质酶基因chiam的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于地中海拟无枝菌酸菌Amycolatopsis mediterranei几丁质酶的序列进行综合优化得到。本发明几丁质酶ChiAm的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了几丁质酶的种类和来源途径，而且酶比活为48U/mg，在较宽的温度范围和较宽的pH范围内均表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种脂肪酶基因、脂肪酶及其应用。本发明脂肪酶基因Lrl‑op，其GC含量为51％，密码子适应指数为0.84，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明脂肪酶基因Lrl‑op，是根据毕赤酵母密码子的偏好性，通过对多枝横梗霉基因组序列进行综合优化得到。本发明脂肪酶LRL是一种1,3位特异性脂肪酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。本发明不仅丰富了脂肪酶的种类和来源途径，而且脂肪酶LRL的酶活性较高，热稳定性和pH稳定性较好，可用于分解甘油酯和/或油脂改性。
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种碱性蛋白酶基因、碱性蛋白酶及其制备方法和应用。本发明碱性蛋白酶基因aprbp的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于芽孢杆菌Bacillus patagoniensis碱性蛋白酶的序列(GenBank:WP_078392427.1)进行综合优化得到。本发明碱性蛋白酶AprBp的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了碱性蛋白酶的种类和来源途径，且其自身具有较高的酶活性，在5L发酵罐中的最高酶活可达18035U/mL，同时，在较宽的温度范围和碱性条件下均表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种内切葡聚糖酶基因、内切葡聚糖酶及其制备方法和应用。本发明内切葡聚糖酶基因macel的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于嗜热真菌Melanocarpus albomyces的内切葡聚糖酶的序列(GenBank:AJ515703.1)进行综合优化得到。本发明内切葡聚糖酶MaCel的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了内切葡聚糖酶的种类和来源途径，且其自身具有较高的酶活性和耐热性，在较宽的pH范围内也表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。
