本发明公开了一种具备更高热稳定性的肌酸脒基水解酶突变体及其应用,涉及生物技术领域,包括突变体V283L、H193Y、E170T、S19L、Y310L、Q151V和/或突变体A180K;其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2‑SEQ ID NO.8所示。突变位点的选择方法,对产碱杆菌Alcaligenes faecalis的Creatniase蛋白的野生型借助深度学习,改造靶点打分;辅以该酶的晶体结构或者同源建模的结构共进化分析来选择靶标位点。该突变体在肌酐检测试剂中的应用。本发明了通过机器学习辅助的定点突变的方式制造了热稳定性提高的的肌酸脒基水解酶突变体。