本发明公开了一种食管鳞癌转移组织及血清外泌体标志物及其应用。检测hsa_circ_0081964的试剂在制备利用组织或血清外泌体诊断食管鳞癌淋巴结转移情况的试剂中的应用。一种食管鳞癌转移情况的血清外泌体辅助诊断试剂盒,包含SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的hsa_circ_0081964特异性引物。本发明提供的组织及血清外泌体circRNA检测方法和试剂盒,能够从样本中准确地检测食管鳞癌组织及外泌体has_circ_0081964,为食管鳞癌淋巴结转移情况提供方便可行的检测方法,为临床上合适的治疗方案的选择提供帮助。