本发明涉及生物化学中核酸检测的技术领域，具体涉及一种基于CRISPR方式检测非洲猪瘟病毒的crRNA及试剂盒。所述crRNA根据如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:6所示的靶向位点设计得到。一种基于CRISPR方式检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其包括所述的crRNA、单链DNA报告序列、缓冲液、试纸条、分析缓冲液及Cas蛋白。利用Cas蛋白在crRNA指导下切割非洲猪瘟病毒双链DNA底物后释放PAM远端产物，激活非特异性切割单链DNA活性的特点而设计的一种高灵敏度，高特异性的快速检测非洲猪瘟病毒的试剂盒。
本发明提供重组小反刍兽疫病毒N蛋白及其表达方法和应用。其中，所述重组小反刍兽疫病毒N蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。本发明还提供稳定表达所述重组小反刍兽疫病毒N蛋白的CHO‑PPRV‑N细胞系，其保藏编号为CGMCC No.12281。本发明还提供包含所述重组小反刍兽疫病毒N蛋白的检测小反刍兽疫的试剂盒。
本发明成功构建了表达西尼罗热病毒(West Nile virus，WNV)PrM/E蛋白的重组新城疫病毒LaSota疫苗株rLa‑WNV‑PrM/E，其保藏号为CGMCC No.10199，并在小鼠模型中系统评价了重组病毒产生的体液和细胞免疫反应。结果显示，该疫苗株能够正确表达PrM/E蛋白。将重组病毒两次免疫C57BL/6小鼠，ELISA结果表明免疫小鼠可产生高水平的PrM/E蛋白特异性IgG；中和试验结果显示免疫小鼠可以产生高水平的WNV中和抗体；流式细胞术表明免疫小鼠能够产生WNVE蛋白表位特异性CD4+和CD8+T细胞免疫反应。该疫苗株作为一种具有前瞻性和储备性、安全高效的西尼罗热防控候选疫苗，对我国应该病的潜在威胁具有十分重要的战略意义。
本发明提供基于免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒，包括含细胞内阳性抗原与阴性抗原的96孔细胞培养板；阳性对照血清；阴性对照血清；样品稀释液；盐水洗涤液；HRP标记鼠抗羊McAb；二组分AEC显色液；终止液；血清稀释板和使用说明书。其中，细胞内阳性抗原为小反刍兽疫病毒rPPRV/GFP感染的BHK‑gSLAM细胞；细胞内阴性抗原为未感染小反刍兽疫病毒的BHK‑gSLAM细胞；阳性对照血清为小反刍兽疫病毒疫苗株PPRV N 75/1免疫山羊后采血，分离获得的免疫阳性血清，中和效价在1∶160以上；阴性对照血清为小反刍兽疫阴性山羊未经免疫直接采血，分离获得的阴性血清。
