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[发明专利]一种测定乳酸链球菌素活力的方法-CN201510072395.0在审
发明人：张良;张钦革;楼庄伟 -专利权人：安泰生物工程股份有限公司
申请日： 2015-02-11 - 公布日： 2015-05-27 - 主分类号： G01N21/31 文献下载
摘要：一种测定乳酸链球菌素活力的方法，它涉及一种测定乳酸链球菌素活力的方法。本发明的方法为：一、分别将乳酸链球菌素对照品或待测样品、藤黄微球菌悬液和质量百分含量为0.0125％刃天青染液加入到96孔板上，震荡96孔板将加入的上述物质混合均匀；二、将步骤一的96孔板在温度为25℃条件下，温浴45～60min；三、从步骤二温浴后的每孔中取上清液，转移到另一块清洁的96孔板中；四、用595纳米滤光片读取96孔板中液体的光吸收数据；五、对步骤四读取的数据进行分析后，即完成。本发明首次建立了刃天青生物比色法，可以快速、准确、高通量测定乳酸链球菌素活力。该法简单、快速、高效、准确、经济。
一种测定乳酸链球菌素活力方法

[发明专利]高效克隆筛选表达载体、其制备方法及用途-CN201210483844.7有效
发明人： 楼庄伟;孔云华;梅佳;贾园;陈侃;宋云鹏;吕强 -专利权人：上海药明康德新药开发有限公司;苏州药明康德新药开发有限公司;无锡药明康德生物技术有限公司
申请日： 2012-11-23 - 公布日： 2014-06-04 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效克隆筛选表达载体，该载体由piggyBac转座系统的ITRs序列插入到哺乳动物表达载体中得到。本发明还公开了上述载体的制备方法及其用途。本发明利用piggyBac转座系统的ITRs序列构建高效克隆筛选表达载体，同时将经过密码子优化的能在小鼠中高效表达的转录酶基因克隆到另外一个真核表达载体上，通过含ITRs序列的表达载体和含转录酶的载体的共表达，将筛选标记与目的基因一同整合到宿主细胞的基因组中，从而大大提高了转染的效率和阳性克隆的筛选率。
高效克隆筛选表达载体制备方法用途

[发明专利]稳定表达人心肌细胞I_ks的细胞模型及其建立方法与应用-CN201210480280.1无效
发明人： 楼庄伟;董海恒;赵娜;梅佳;贾园;陈英;陈侃;孔云华;吴瑶;宋云鹏;吕强 -专利权人：苏州药明康德新药开发有限公司;上海药明康德新药开发有限公司;无锡药明康德生物技术有限公司
申请日： 2012-11-23 - 公布日： 2014-06-04 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种稳定表达人心肌细胞I_ks的细胞模型及其建立方法与应用。该细胞模型为CHOK1-KCNQ1/KCNE1细胞系，构建方法是以CHO-K1细胞为宿主细胞，将KCNQ1基因编码的α亚基单位和KCNE1基因编码的β亚基单位转染入CHO-K1细胞中。本发明通过将组成I_ks通道的KCNQ1基因编码的α亚基单位和KCNE1基因编码的β亚基单位共同转染到CHO-K1细胞中，建立了体外稳定表达KCNQ1/KCNE1细胞模型，为药物的体外高通量筛选提供了一种新的有效途径。
稳定表达人心细胞 sub ks 模型及其建立方法应用

[发明专利]表达KCNQ1/KCNE1蛋白的宿主细胞及其制法-CN201210468883.X有效
发明人： 楼庄伟;董海恒;宋云鹏;赵娜;陈英;梅佳;贾园;陈侃;孔云华;吴瑶;吕强 -专利权人：上海药明康德新药开发有限公司;苏州药明康德新药开发有限公司;无锡药明康德生物技术有限公司
申请日： 2012-11-19 - 公布日： 2014-05-28 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达KCNQ1/KCNE1蛋白的宿主细胞及其制法，该宿主细胞是通过BacMam重组杆状病毒载体的构建、BacMam重组杆状病毒的制备，以及将BacMam重组杆状病毒转入CHO细胞后所形成的。通过该宿主细胞可获得KCNQ1/KCNE1通道蛋白，为高通量的药物筛选提供研究基础。
表达 kcnq1 kcne1 蛋白宿主细胞及其制法

[发明专利]一种生物防霉剂及其应用-CN201310475600.9无效
发明人：柳艳慧;张良;徐茂芹;杜浩;刘成彦;楼庄伟;张钦革 -专利权人：安泰生物工程股份有限公司
申请日： 2013-10-12 - 公布日： 2014-01-22 - 主分类号： A01N43/90 文献下载
摘要：一种生物防霉剂及其应用，它涉及防霉剂及其应用。本发明要解决现有防霉剂有腐蚀作用和引起变色及残留印渍的问题。本发明的生物防霉剂是由纳他霉素0.2～2g/L、环糊精0.2～10g/L、亲水性溶剂100～800g/L和余量的纯净水组成的。本发明的生物防霉剂用于衣物和家具、墙面的防霉。本发明的生物防霉剂是由纯生物的防霉剂纳他霉素组成，具有非常好的抑制霉菌的效果，喷到衣物、家具等上面没有腐蚀作用，不会引起变色及残留印渍等现象。本发明应用于防霉剂领域。
一种生物防霉及其应用

[发明专利]一种用于预防牛乳房炎的牛乳房清洗剂-CN201310479603.X无效
发明人：徐茂芹;张良;王贵元;马之霄;郭思佳;郭坤;刘成彦;陈傲冰;杜浩;楼庄伟;张钦革 -专利权人：安泰生物工程股份有限公司
申请日： 2013-10-15 - 公布日： 2014-01-22 - 主分类号： A61K38/16 文献下载
摘要：一种用于预防牛乳房炎的牛乳房清洗剂，它涉及一种用于清洗牛乳房的清洗剂，本发明要解决现有牛乳房清洗剂抑制和杀死引起牛乳房炎细菌的效果差以及易使牛奶中碘含量超标的问题。牛乳房清洗剂由乳酸链球菌素、ε-多聚赖氨酸（ε-PL）、EDTA二钠、甘油、柠檬酸、聚乙烯吡咯烷酮和余量的纯水组成。本发明用于预防牛乳房炎的牛乳房清洗剂对于引起牛乳房炎的致病菌具有良好的杀灭作用，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的杀菌率可达到100%，同时牛乳房清洗剂中不含有碘，解决了牛奶中碘含量易超标的问题。本发明的清洗剂主要应用于奶牛挤奶前后牛乳头的清洁和杀菌。
一种用于预防牛乳洗剂

[发明专利]HA-NDV-F基因重组杆状病毒表达载体的构建方法-CN201210093071.1无效
发明人：葛菁萍;高冬妮;宋刚;凌宏志;平文祥;楼庄伟;唐晓艳;金丽颖;安琪;叶磊 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2012-03-31 - 公布日： 2012-10-03 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：HA-NDV-F基因重组杆状病毒表达载体的构建方法，涉及基因重组杆状病毒表达载体的构建方法。它解决了目前新城疫的病毒疫苗存在成本高的问题。方法：一、以pNDV-F-T为模板PCR扩增，目的片段进行TA克隆及连接，得pTYL-HA-F，酶切得HA-F片段；二、六种质粒分别单酶切及去磷酸化处理，然后进行纯化；三、连接后得六种重组转移载体；四、转化感受态细胞，经提取后得Bacmid-YL；五、转染sf9细胞，得六种重组杆状病毒即完成。本发明利用杆状病毒表达系统，使其直接在中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1内表达HA-F抗原蛋白；为制备鸡新城疫基因工程疫苗奠定了基础，以此制备的新城疫病毒疫苗成本可有效降低。
ha ndv 基因重组杆状病毒表达载体构建方法

[发明专利]HA-VP2基因重组杆状病毒表达载体的构建方法-CN201210093043.X无效
发明人：葛菁萍;高冬妮;宋刚;凌宏志;平文祥;楼庄伟;唐晓艳;金丽颖;安琪;田兆峰 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2012-03-31 - 公布日： 2012-08-01 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：HA-VP2基因重组杆状病毒表达载体的构建方法，涉及基因重组杆状病毒表达载体的构建方法。它解决了目前杆状病毒介导的外源基因在CHO细胞中的表达率较低的问题。方法：一、以pMD18-T-VP2为模板进行PCR扩增，获得目的片段进行TA克隆及载体连接，得pTZF-HA-VP2；二、九种质粒和pTZF-HA-VP2分别进行双酶切，酶切后的目的片段进行连接，得九种重组转移载体；三、九种重组转移载体分别转化感受态细胞，经提取后得rBac-TZF-X；四、rBac-TZF-X转染sf9细胞，得rBV-TZF-X即完成。本发明添加调控元件WPRE可以提高杆状病毒介导外源基因在CHO细胞中的表达率。
ha vp2 基因重组杆状病毒表达载体构建方法

[发明专利]具有CMV启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法-CN201210093206.4无效
发明人：葛菁萍;高冬妮;宋刚;凌宏志;平文祥;楼庄伟;唐晓艳;安琪;金丽颖 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2012-03-31 - 公布日： 2012-08-01 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：具有CMV启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法，涉及可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法。方法：酶切pcDNA3.1(-)；酶切pFastBac1；二者连接得pFastBac1-pcDNA3.1(-)；pEGFP-C3进行扩增，产物经纯化后于T-Vector连接得pMD-EGFP；pFastBac1-pcDNA3.1(-)和pMD-EGFP分别酶切，再连接，得pFastBac1-pcDNA3.1(-)-EGFP；制Bacmid-EGFP；转染sf9细胞，得CN-EGFP即完成。本发明首次利用杆状病毒表达载体系统在OL细胞中导入并表达外源基因，拓宽了杆状病毒可转导的哺乳动物细胞范围。
具有 cmv 启动子表达 egfp 重组杆状病毒构建方法

[发明专利]具有CBA启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法-CN201210012796.3无效
发明人：葛菁萍;高冬妮;平文祥;楼庄伟 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2012-01-16 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：具有CBA启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法，涉及一种具有CBA启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法。解决现有重组杆状病毒介导的基因表达效率低的问题。方法：依次构建pMD18-T-GV、pFastBac1-GV、pGM18-T-pHGV、pMD18-T-CBA、pFastBac[pH-]-pHBOX、pSD-CBA、pSD、pSD-L-ITR和pSD-ITRs；构建pMD18-T-EGFP；构建pSD-EGFP；构建pSD-ITRs-EGFP；转化DH10Bac细胞，获得重组载体；转染，获得重组杆状病毒。经过修饰改造的重组杆状病毒所介导的EGFP基因的表达效率明显增强。
具有 cba 启动子表达 egfp 重组杆状病毒构建方法

[发明专利]EGFP基因重组杆状病毒表达载体的构建方法-CN201210012811.4无效
发明人：葛菁萍;高冬妮;平文祥;楼庄伟 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2012-01-16 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：EGFP基因重组杆状病毒表达载体的构建方法，涉及EGFP基因重组杆状病毒表达载体的构建方法。是要解决目前重组杆状病毒质粒载体转导效率低、表达效率较工业生产要求差距大、表达时间短等问题。方法；一、PCR扩增EF1α基因；二、构建质粒pT-EF1α；三、构建质粒pWK；四、PCR扩增L-ITR基因，构建pWK-L-ITR；五、PCR扩增R-ITR基因，构建pWK-ITR；六、PCR扩增EGFP基因，构建EGFP基因重组杆状病毒表达载体pWK-ITR-EGFP。本发明通过添加VSV-GED、WPRE和ITR元件，增强了外源基因的表达效率，增强了病毒的转导效率，延长了表达时间。
egfp 基因重组杆状病毒表达载体构建方法

[发明专利]一种可用于制作禽类疫苗的重组杆状病毒的制备方法-CN200610009656.5无效
发明人： 楼庄伟;平文祥;葛菁萍;李盛贤;宋刚;凌宏志;高冬妮;张贺楠 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2006-01-23 - 公布日： 2006-07-26 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：一种可用于制作禽类疫苗的重组杆状病毒的制备方法，它涉及一种重组杆状病毒的制备方法。它为制作出可防治禽类传染性疾病的重组杆状病毒疫苗奠定了物质基础。其制备方法：(一)构建含有CMV－IE启动子的载体；(二)构建带有CMV－IE启动子和外源基因的重组载体；(三)构建重组杆状病毒，收集病毒粒子测定病毒效价；(四)检测重组杆状病毒外源基因的表达；步骤(三)包括1.重组载体转化DH10Bac细胞；2.提取重组杆状病毒BacmidDNA；3.PCR扩增Bacmid DNA；4.Bacmid DNA转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒；5.扩增重组杆状病毒；6.蚀斑试验；7.蚀斑纯化；8.收集重组杆状病毒粒子；9.测定重组杆状病毒效价。本发明为制作出可防治禽类传染性疾病的重组杆状病毒疫苗奠定了物质基础。
一种用于制作禽类疫苗重组杆状病毒制备方法

[发明专利]HD34－1菌株的构建及以其为发酵菌株酿造无醇啤酒的方法-CN200410043719.X无效
发明人：平文祥;葛菁萍;宋刚;楼庄伟;贾树彪;吴国峰;赵辉;周东坡 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2004-07-16 - 公布日： 2005-03-16 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：HD34－1菌株的构建及以其为发酵菌株酿造无醇啤酒的方法，它涉及一种基因工程菌株的构建及无醇啤酒的酿造方法。HD34－1是这样构建的：a.设计5′端、3′端引物；b.扩增ADH基因；c.与表达载体pYC6/CT连接；d.转化进入Saccharomyces cerevisiae HD34；e.初筛转化子，获得HD34－1菌株，以其为发酵菌株酿造无醇啤酒的方法如下：a.活化菌株；b.将菌种转到培养基中摇瓶培养；c.将扩培菌种接种到含有麦芽汁的发酵罐中；d.充氧、发酵；e.测量糖度，当糖度降到5°BX时停止发酵；f.降温，放置一周后即可出罐。本发明的菌株能催化伯醇和醛的正反应，降低乙醇产量，简化生产工艺。
hd34 菌株构建以其发酵酿造啤酒方法

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