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[发明专利]一种原人参二醇酵母细胞工厂的构建方法及其应用-CN202211048608.2有效
发明人： 李检秀;谢能中 -专利权人：广西科学院
申请日： 2022-08-29 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开一种原人参二醇酵母细胞工厂的构建方法及其应用，以酿酒酵母BY4742为出发菌株，通过同源重组的方式，将不同物种来源的3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶、法尼基焦磷酸合成酶、角鲨烯合酶、角鲨烯环氧酶、达玛烯二醇合酶、原人参二醇合酶以及提供还原力NADPH的辅酶，整合到BY4742染色体多拷贝位点区，构建得到原人参二醇底盘细胞，然后经过多途径代谢网络优化，促进内质网膜扩增，削弱竞争性代谢途径法尼醇和羊毛甾醇的代谢流。基于上述组合策略构建得到的PPD细胞工厂，摇瓶批次发酵产量达到563.60±1.65mg/L，以葡萄糖、木薯淀粉水解液、甘蔗汁、甘蔗糖蜜为碳源进行5L发酵罐补料发酵，PPD产量最高为23.92±0.96 g/L。
一种人参酵母细胞工厂构建方法及其应用

[发明专利]一株青霉属真菌Penicillium sp. YMS6及其应用-CN202310711611.6在审
发明人：刁梦雪;谢能中;李检秀 -专利权人：广西科学院
申请日： 2023-06-15 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明提供一株青霉属真菌Penicillium sp.YMS6及其应用，该真菌于2023年5月10日在中国典型培养物保藏中心登记保藏，保藏号为CCTCC No：M2023717。该菌株能够同时或单独转化三七皂苷中的二醇型人参皂苷Rb1及三醇型人参皂苷Rg1生成药用价值更高的稀有人参皂苷F2及F1，其为生物发酵制备稀有人参皂苷拓展新的渠道；同时克服了传统物理方法及化学方法反应步骤繁多、副产物较难去除及环境污染等缺点，为获得稀有人参皂苷提供了绿色、高效的途径，具有较高应用价值。
青霉真菌 penicillium sp yms6 及其应用

[发明专利]一种香紫苏内生真菌及其筛选分离与应用-CN202310711614.X在审
发明人：刁梦雪;谢能中;蒙丽钧;李检秀 -专利权人：广西科学院
申请日： 2023-06-15 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明提供一种香紫苏内生真菌及其筛选分离与应用，该菌为分离自香紫苏植物的散囊菌纲曲霉属的内生真菌，分类命名为Aspergillus tubingensis XY17，于2022年11月07日在中国典型培养物保藏中心登记保藏，保藏号为CCTCC No：M20221729。该菌能够转化香紫苏醇产生香紫苏醇的结构类似物，克服了传统化学方法反应步骤繁多、副产物较难去除及环境污染等缺点，可实现规模化生产，具有较高应用价值。
一种紫苏真菌及其筛选分离应用

[发明专利]一组糖基转移酶基因及其在制备三七/人参皂苷中的应用-CN202110285350.7有效
发明人： 李检秀;谢能中;李燕婷 -专利权人：广西科学院
申请日： 2021-03-17 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开一组糖基转移酶基因及其在制备三七/人参皂苷中的应用，所述的基因为首次在三七基因组中挖掘得到3个糖基转移酶新基因，分别命名为PnUGT 87、PnUGT 19、PnUGT12，具有如SEQ ID NOs：1、2或3所示的核苷酸序列；同时公开了所述的糖基转移酶基因编码的氨基酸序列，分别如SEQ ID NOs：4、5或6所示。同时本发明还公开了含有上述基因的表达载体，以及由所述表达载体转化的宿主细胞。本发明的糖基转移酶基因弥补了现有人参/三七皂苷生物合成相关的基因的数量较少，绝大部分人参/三七皂苷分子合成机制尚不明确，为人工合成人参/三七皂苷单体提供新基因。
一组糖基转移酶基因及其制备三七人参皂苷中的应用

[发明专利]一种近红外激发的核壳结构复合抗菌纳米纤维膜及其制备方法-CN201911186182.5有效
发明人：唐培朵;黄岗;杜芳黎;李检秀;黄华林;杜奇石 -专利权人：广西科学院
申请日： 2019-11-28 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： A61K9/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种近红外激发的核壳结构复合抗菌纳米纤维膜及其制备方法，属于纤维材料技术领域。本发明运用同轴静电纺丝方法，以抗菌类药物/聚吡咯/聚己内酯为核层材料，以壳聚糖为壳层材料，制备出具有抗菌效果的复合纳米纤维膜。本发明用壳聚糖将抗菌类药物包埋在纤维内部，从而提高药物的包封率,使药物释放速度减慢，并有效减少药物的突释，并保证药物活性。另外，聚吡咯在808nm近红外光照射下表现出良好的光转热性能，在光热效应的作用下药物快速释放，利用光热与抗菌类药物的协同作用可以在短时间内达到更高的抗菌效率。
一种红外激发结构复合抗菌纳米纤维及其制备方法

[发明专利]一种生产乙偶姻基因工程菌株及其构建方法与应用-CN202211601379.2在审
发明人：谢能中;陈先锐;刁梦雪;李检秀;蒙丽钧 -专利权人：广西科学院
申请日： 2022-12-13 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产乙偶姻基因工程菌株及其构建方法与应用，先筛选和鉴定影响大肠杆菌乙偶姻胁迫抗性的功能基因，利用基因组遗传改造手段引入抗逆因子以提高菌株对产物的耐受性，再通过优化重组质粒拷贝数提高乙偶姻合成途径关键基因的表达水平，获得高合成能力和高胁迫抗性的工程菌株；然后采用廉价原料发酵合成乙偶姻，并在适宜条件下高效转化生成四甲基吡嗪；最后使用脱色纯化后的发酵液转化得到了较高纯度的四甲基吡嗪。本发明工艺方法绿色环保，可生成高值化学品（R）‑乙偶姻和四甲基吡嗪，为将来规模化工业生产奠定了重要的理论和技术基础。
一种生产乙偶姻基因工程菌株及其构建方法应用

[发明专利]重组微生物及其用途、生产四甲基吡嗪的方法-CN202110869706.1在审
发明人：谢能中;陈先锐;李检秀;黄日波 -专利权人：广西科学院
申请日： 2021-07-30 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提出了一种重组微生物，该重组微生物pflB、ahdE、PPS基因被沉默。pflB、ahdE、PPS基因被沉默后，重组微生物生成甲酸、乙醇、甘油途径被抑制，重组微生物(R)‑乙偶姻合成显著增加。
重组微生物及其用途生产甲基方法

[发明专利]一种利用微波对土壤灭菌杀虫的方法-CN201910492758.4有效
发明人：谢能中;黄志民;陈先锐;黄慨;黄艳燕;李检秀 -专利权人：广西科学院;广西中科微波先进制造产业技术研究院;南宁市中科微波先进制造产业技术研究院
申请日： 2019-06-06 - 公布日： 2021-11-30 - 主分类号： A01M17/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用微波对土壤灭菌杀虫的方法，其包括如下步骤：在所需微波灭菌杀虫区域架设导轨，然后安装微波灭菌杀虫设备，微波灭菌杀虫设备包括微波部和打凿部，打凿部可对土壤进行打孔，然后微波部是微波发射天线进入孔中进行微波灭菌杀虫操作。本发明采用物理方法对土壤进行灭菌杀虫，通过微波灭菌杀虫装置中的打凿部和微波部相配合，使微波发射器能深入土壤中，微波灭菌杀虫效果更佳，可杀灭土壤120‑160cm深处的菌虫，尤其是对三七根腐病病原菌、香蕉枯萎病病原菌、食用真菌病原菌、植物寄生线虫等实现灭杀，是一种方便、快捷、高效和安全灭菌杀虫方法。
一种利用微波土壤灭菌杀虫方法

[发明专利]一种蛋白质热稳定性改造的方法及其在普鲁兰酶中的应用-CN201810204136.2有效
发明人： 李检秀;杜奇石;黄日波;谢能中;陈先锐;黄艳燕;王青艳;秦艳 -专利权人：广西科学院
申请日： 2018-03-13 - 公布日： 2021-08-10 - 主分类号： C07K1/107 文献下载
摘要：本发明涉及一种蛋白质热稳定性改造的方法及其在普鲁兰酶中的应用，该方法首先建立待改造蛋白质三维模型，用分子动力学模拟计算待改造蛋白质三维模型的分子热运动，根据氨基酸的Cα碳原子的位置偏移值Pi的大小判断待改造蛋白质各部分的热稳定性，确定待改造蛋白质的不稳定结构域，通过定点变异得到待改造蛋白质的突变体，从内部和外部加固不稳定结构域，并选择合适的表达系统进行表达，得到热稳定性改善的蛋白质突变体。野生型脱支普鲁兰酶BDPulA经本发明的方法改造得到热稳定性改善的BDPulA突变体，热处理1 h和2 h后，残余酶活65.54‑88.1%、52.15‑77.27%，分别是野生型脱支普鲁兰酶BDPulA的1.29‑1.75倍、1.14‑1.67倍；其T1/2 2.0‑4.5 h，是野生型脱支普鲁兰酶BDPulA的2.0‑4.5倍。
一种蛋白质热稳定性改造方法及其普鲁兰酶中的应用

[发明专利]生产(R)-乙偶姻基因工程菌株的构建方法及其应用-CN201710507508.4有效
发明人：谢能中;黄日波;陈先锐;李检秀;黄艳燕 -专利权人：广西科学院
申请日： 2017-06-28 - 公布日： 2020-12-18 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产(R)‑乙偶姻基因工程菌株的构建方法及其应用，该方法是将α‑乙酰乳酸合成酶基因、α‑乙酰乳酸脱羧酶基因和NADH氧化酶基因的核苷酸序列进行密码子优化，利用人工合成的方法获得包含三个基因的基因簇；将基因簇插入表达载体中，获得多顺反子重组质粒；将多顺反子重组质粒导入宿主菌E.coli，并敲除主要副产物合成途径的关键基因，获得生产(R)‑乙偶姻的基因工程菌株。本发明提供的工程菌株所用的原料来源广泛、成本低，菌株无致病性，氧化型辅酶NAD+能够有效再生，菌株的(R)‑乙偶姻产量、生产效率高，最高产量可达到72.1 g/L，光学纯度可达99%以上。本发明还利用非粮木薯粉和廉价氮源作为发酵原料生产(R)‑乙偶姻，降低了生产成本。
生产乙偶姻基因工程菌株构建方法及其应用

[发明专利]光学纯meso-2,3-丁二醇高产工程菌株的构建方法及应用-CN201710509034.7有效
发明人：黄艳燕;黄日波;谢能中;李检秀;陈先锐;王青艳;陈东;杜奇石 -专利权人：广西科学院
申请日： 2017-06-28 - 公布日： 2020-11-10 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种光学纯meso‑2,3‑丁二醇高产工程菌株的构建，该构建方法是将α‑乙酰乳酸合成酶基因、α‑乙酰乳酸脱羧酶基因和meso‑2,3‑丁二醇脱氢酶基因的核苷酸序列进行密码子优化，然后拼接获得包含该三个基因的基因簇，再将基因簇导入表达载体中获得多顺反子重组质粒，最后将重组质粒再导入宿主菌E.coli即得所述高产工程菌，该菌所用的合成原料来源广泛、成本低，菌株无致病性，菌株产量高、生产效率高、稳定性好，最高产量可达到91.5 g/L，光学纯度可达99%以上。本发明同时公开了上述高产工程菌株利用廉价木薯粉为碳源，利用棉籽蛋白粉、豆粕粉、豆饼粉或花生蛋白粉为氮源在生产光学纯meso‑2,3‑丁二醇中的应用，降低了生产成本。
光学 meso 丁二醇高产工程菌株构建方法应用

[发明专利]生产(R,R)-2,3-丁二醇基因工程菌株的构建方法及其应用-CN201710509047.4有效
发明人：陈先锐;黄日波;谢能中;黄艳燕;韦航;李检秀;王青艳;李晓明 -专利权人：南宁邦尔克生物技术有限责任公司;广西科学院
申请日： 2017-06-28 - 公布日： 2020-11-10 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产(R,R)‑2,3‑丁二醇基因工程菌株的构建方法及其应用，该方法是将α‑乙酰乳酸合成酶基因、α‑乙酰乳酸脱羧酶基因和(R,R)‑2,3‑丁二醇脱氢酶基因的核苷酸序列进行密码子优化，利用人工合成的方法获得包含三个基因的基因簇；将基因簇插入表达载体中，获得多顺反子重组质粒；将多顺反子重组质粒导入宿主菌E. coli，并敲除主要副产物合成途径的关键基因，获得生产(R,R)‑2,3‑丁二醇的基因工程菌株。本发明提供的工程菌株所用的原料来源广泛、成本低，菌株无致病性，菌株的(R,R)‑2,3‑丁二醇产量、生产效率高，最高产量可达到93.5 g/L，光学纯度可达99%以上。本发明还利用非粮木薯粉和廉价氮源作为发酵原料生产(R,R)‑2,3‑丁二醇，降低了生产成本。
生产丁二醇基因工程菌株构建方法及其应用

[实用新型]一种温室大棚用可对周围进行灭火的环境监测装置-CN201920068967.1有效
发明人：王小卉;黄贞;李检秀;陈妙琳 -专利权人：岭南师范学院
申请日： 2019-01-16 - 公布日： 2019-11-26 - 主分类号： G01N33/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种温室大棚用可对周围进行灭火的环境监测装置，包括环境监测装置本体和管道，所述环境监测装置本体的顶端设置有外壳，且环境监测装置本体的一侧设置有烟雾报警器，所述外壳的内部嵌入设置有支架，且外壳的内部靠近支架一侧位置处设置有电动机，所述支架的顶端设置有摄像头。本实用新型设置烟雾报警器和灭火箱，能便于使用者对环境监测装置本体周围进行灭火，避免了温室大棚内发生火灾导致相关仪器受损的问题，设置反应室，能便于使用者通过反应室生成二氧化碳进行排放，避免了温室大棚内二氧化碳含量较低导致使用者呼吸不便的问题，设置电动机，能便于使用者对摄像头进行旋转。
环境监测装置支架本实用新型烟雾报警器摄像头顶端设置电动机反应室二氧化碳灭火温室嵌入设置温室大棚灭火箱位置处火灾受损呼吸排放

[发明专利]一种丁二酮还原酶的应用-CN201510406619.7在审
发明人： 李检秀;谢能中;黄日波;黄艳燕;刘祺霞;王青艳;严少敏;陆迪;陈先锐 -专利权人：广西科学院
申请日： 2015-07-13 - 公布日： 2017-01-18 - 主分类号： C12P7/62 文献下载
摘要：本发明提供了一个来源于阴沟肠杆菌Enterobacter cloacae subsp.dissolvens SDM的丁二酮还原酶BDH的应用。通过酶学分析，证实所述BDH酶学活性高、底物特异性好、光学选择性单一，具有广阔的工业应用前景。根据所述BDH的特有性质，本发明提供了利用所述BDH或含有所述BDH编码基因bdh的细胞生物催化合成手性纯(S)-乙偶姻、(R)-乙偶姻、(S，S)-2，3-丁二醇、meso-2，3-丁二醇以及乳酸乙酯的多种应用，对实现手性纯(S)-乙偶姻/(R)-乙偶姻和(S，S)-2，3-丁二醇/meso-2，3-丁二醇的合成研究具有重要意义。
一种丁二酮还原酶应用

[发明专利]一种光学纯R-乙偶姻的生产方法-CN201410341765.1有效
发明人：谢能中;黄日波;李检秀;郭铃;黄艳燕;杜奇石;王青艳;李亿 -专利权人：广西科学院
申请日： 2014-07-17 - 公布日： 2017-01-04 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：一种光学纯R‑乙偶姻的生产方法，包括如下步骤：将(R,R)‑2,3‑丁二醇脱氢酶基因(bdh)和葡萄糖脱氢酶基因(gdh)在大肠杆菌中共表达，并以此重组大肠杆菌休止细胞为生物催化剂，以丁二酮为前体转化生产光学纯R‑乙偶姻。葡萄糖脱氢酶能够提供(R,R)‑2,3‑丁二醇脱氢酶所需的辅酶NADH，而(R,R)‑2,3‑丁二醇脱氢酶在NADH存在的条件下具有催化丁二酮生成光学纯R‑乙偶姻的特性，R‑乙偶姻的产量可达26g/L，光学纯度为99.6％。本发明的方法培养基简单，操作过程简便，产物分离方便，不需要复杂的手性拆分步骤，并且实现胞内辅酶的再生，成本低，极具工业应用前景。
一种光学乙偶姻生产方法

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