本发明涉及一种检测血浆游离DNA中RNF213突变基因的试剂盒及其应用。本发明公开了血浆游离DNA中RNF213突变基因及突变位点,以及检测上述血浆游离DNA中RNF213突变基因的试剂盒,该试剂盒包括根据上述RNF213突变基因设计的特异性引物及特异性探针,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1~24所示,以及缓冲液,dNTPs,TaqDNA聚合酶,MgCl2和DNA提取试剂盒。本发明首次揭示了RNF213基因突变在非小细胞肺癌诊断中的应用,并能很好的鉴别肿瘤良恶性。根据该发现设计出检测RNF213基因突变的试剂盒,为肺结节患者的诊断提供指导。