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[发明专利]一种根癌农杆菌介导的黑木相思高效遗传转化体系及其构建方法-CN202310894372.2在审
发明人：范春节;曾炳山 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2023-07-20 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种根癌农杆菌介导的黑木相思高效遗传转化体系及其构建方法，以黑木相思优良无性系SR3茎段为外植体，并研制不定芽诱导的培养基，采用含有重组农杆菌的侵染液侵染黑木相思不经过预培养的茎段，然后进行浸染和共培养，将外植体进行转基因株系的诱导和筛选培养，得到黑木相思抗性芽，再筛选得到完成遗传转化的黑木相思阳性植株。其中，通过对实验条件的优化来提高不定芽的诱导率以及获得高效的遗传转化；本发明为本源植物的基因导入和敲除等功能研究提供技术支持，有利于解析黑木相思心材形成、发育等的分子机理，为黑木相思重要基因的功能解析提供参考，且可以在黑木相思优良无性系的基础上进一步获得转基因和基因编辑新品种。
一种根癌农杆菌相思高效遗传转化体系及其构建方法

[发明专利]一种土沉香易结香优株金丝油的无性快繁方法-CN202310687128.9在审
发明人：李湘阳;曾炳山;胡冰 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2023-06-09 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种土沉香易结香优株金丝油的无性快繁方法。本发明方法采集金丝油的当年生枝条，以其带腋芽的茎段为外植体，采用特定方法消毒除菌，大大降低了褐死率及污染率；研制特定的培养基进行丛芽诱导、继代增殖及生根诱导，丛芽诱导率为15.4％且无玻璃化，增殖倍数达2.7，生根率达到72.5％；选择合适的炼苗条件和移植方法，成活率可达75％以上；由此得到大量土沉香易结香优株金丝油的无性系种苗，该类种苗能完全继承优株金丝油的优良结香特性，充分满足市场对金丝油无性系苗木的需求。
一种沉香易结香优株金丝无性方法

[发明专利]一种尾巨桉DH3213的遗传转化方法-CN202310091854.4在审
发明人：范春节;曾炳山;张昊楠 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2023-02-10 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种尾巨桉DH3213的遗传转化方法。本发明的根癌农杆菌介导的桉树栽培良种尾巨桉DH3213的高效、快速的不定芽再生和转化方法，解决了现有桉树栽培良种包括尾巨桉DH3213尚未建立遗传转化体系以及桉树遗传转化周期长的问题。本发明突破了桉树栽培良种遗传转化体系的建立，可以直接用于桉树栽培良种DH3213转基因和基因编辑新品种创制；建立的遗传转化体系比其他体系缩短时间1/3‑1/2，可以用于桉树重要性状的基因功能解析；本发明方法周期短，效率高，程序简单，操作方便，结果可靠。
一种尾巨桉 dh3213 遗传转化方法

[发明专利]一种土沉香新绿奇楠克隆株的获取方法-CN202210168325.5在审
发明人：李湘阳;曾炳山;陆钊华;胡冰;郭瑞民 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2022-02-23 - 公布日： 2022-06-14 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明属于植物组织再生的技术领域，具体涉及一种土沉香新绿奇楠克隆株的获取方法，包括如下步骤：1)植物组织选择：选择环境透光度≥70％的土沉香绿奇楠母株，选择靠近土沉香优树中部的枝条进行克隆繁殖；2)克隆繁殖：将选取的枝条的中下部进行环割，环割口宽4～5cm，剥除树皮，深度达木质部，用刀轻轻刮除形成层，环割后晾干5～7天，用生根剂均匀涂抹在环割部位；3)克隆苗经过精细管理，获得土沉香新绿奇楠植株；该方法的优点是子代可以完全继承母株的优良性状，并能在较短时间以高达60％的成功率获得高度为50～100cm新绿奇楠克隆株，这样高度的苗木已经达到了上山造林的用苗标准。
一种沉香新绿克隆获取方法

[发明专利]一种苗木批量菌剂接种方法-CN202010397758.9有效
发明人：刘英;潘雪玉;曾炳山;宋杰;李志宏;何卫忠 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2020-05-12 - 公布日： 2021-12-10 - 主分类号： A01G7/06 文献下载
摘要：本发明公开一种苗木批量菌剂接种方法，包括：将基质填充到具有透水孔的育苗袋中；向育苗袋中移入幼苗；把移入幼苗的育苗袋放入沥水篮中，将装有育苗袋的沥水篮置于菌剂容器，并向菌剂容器内加入菌剂，浸泡接种后，将沥水篮和其内育苗袋取出。本发明对低龄苗木适用性强，可进行大批量接种，其接种过程中无需从基质中取出苗木，可减少对苗木根系的损伤，从而增加苗木接种的成活率。连同基质一同浸泡的操作方法提高了接种的成功率，有利于功能菌株的定殖。沥水篮可保证在接种结束后快速沥去多余水分，不但能避免苗木受到涝害，还可避免菌剂粘附在苗木的地上部分引起苗木倒伏。本发明的苗木批量菌剂接种方法操作简便，降低了菌剂的使用门槛。
一种苗木批量接种方法

[发明专利]一种降香黄檀的组培苗继代增殖培养基-CN201910140130.8有效
发明人：李湘阳;曾炳山;徐大平 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2019-02-26 - 公布日： 2021-11-09 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种降香黄檀的组培苗继代增殖培养基，属于植物育种领域，培养基的大量元素由NH4NO3、KH2PO4、KNO3以及MgSO4·7H2O组成，有利于提高降香黄檀的增殖效率，包括增殖倍数的提高以及增殖苗高度的提高；在合适的大量元素配比下，营养成分符合降香黄檀组培苗增殖生长的需要，才能够均衡而平稳地供给降香黄檀组培苗的生长发育，并保证降香黄檀组培苗既有较高的增殖倍数又有较快的生长速度。
一种降香黄檀组培苗继代增殖培养基

[发明专利]一种交趾黄檀的组织培养方法-CN202110019376.7有效
发明人：李湘阳;曾炳山 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2021-01-07 - 公布日： 2021-10-26 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明属于植物组织培养的技术领域，涉及一种交趾黄檀的组织培养方法，包括如下步骤：1)外植体采集和消毒：采集交趾黄檀新萌枝条的顶梢作为外植体，消毒；2)交趾黄檀外植体消毒后进行诱导培养之后转接至增殖培养，所述诱导培养的培养基为1/2MS培养基+TDZ 0.1～0.2mg/L，所述增殖培养的培养基为1/2MS培养基+TDZ 0.05～0.1mg/L；3)生根诱导；4)炼苗和移植，所述方法能够获得大量交趾黄檀的优良无性系苗木，并将这些优良无性系苗木用于人工林的营造、提高交趾黄檀人工林的产量并缩短木材的产出周期，满足市场的需求，克服了以往交趾黄檀人工林个体间分化大、生长差异大、木材产量不稳定的问题。
一种交趾黄檀组织培养方法

[发明专利]一种基于发根农杆菌介导的桉树转基因方法-CN202110853447.3在审
发明人：范春节;徐建民;罗萍;裘珍飞;曾炳山 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2021-07-27 - 公布日： 2021-09-24 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于发根农杆菌介导的桉树转基因方法，包括以下步骤：S1、无菌桉树增殖芽苗的准备，S2、发根农杆菌的活化和培养，S3、外植体的浸染，S4、共培养，S5、发根诱导和培养，S6、组织化学或荧光检测，S7、PCR检测。有益效果是：利用含35S:GUS报告基因的发根农杆菌Ar1193菌液浸染尾巨桉无菌芽苗，获得根部转化的嵌合体转基因植株，不仅可以大大缩短转化周期，实验结果也比较直观，且能够长期稳定表达；桉树离体毛状根体系为桉树基因功能验证提供了一种快速可靠的方法，同时可以为在根部特异表达的高效营养利用和抗病的转基因桉树新品种的获得奠定基础。
一种基于发根杆菌桉树转基因方法

[发明专利]一种黑木相思难生根无性系组培苗的驯化工艺-CN201911018163.1有效
发明人：裘珍飞;范春节;曾炳山;叶森辉;冯家勇 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2019-10-24 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明属于植物驯化移植的技术领域，具体涉及一种黑木相思难生根无性系组培苗的驯化工艺。包括如下步骤：1）培养生根诱导芽苗：选择黑木相思难生根无性系组培苗，采用培养基进行生根诱导，获得生根诱导芽苗；2）种植芽苗：将芽苗种植在海绵支撑的育苗盘中，种植时把海绵块浸湿，底层装纯净水，加盖盖子；3）培养室培养：将育苗盘放置于培养室中，并在培养的中期阶段每天早晚打开盖子通风透气10‑20分钟；4）日光室温培养：将育苗盘转移到日光室温，全日打开育苗盘盖子，并早晚喷雾1次。可大大提高难生根无性系组培苗的移植成活率和生根率，可达到100%，改善苗木质量，缩短苗圃培育时间，节约苗圃管理成本，提高黑木相思组培苗生产效率。
一种相思生根无性系组培苗驯化工艺

[发明专利]一种黑木相思组培苗标准化生产工艺-CN201811523806.3有效
发明人：裘珍飞;曾炳山;范春节;邓文林;陈耀辉 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2018-12-12 - 公布日： 2020-09-25 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：一种黑木相思组培苗标准化生产工艺，包括增殖苗生产和生根苗生产，增殖苗生产内容涉及接种密度、增殖培养时期转接周期和生产苗木时期的转接周期；生根苗生产内容包括接种密度、苗木切割高度、苗木切割程度、生根苗培养时放置时间和炼苗温室放置时间，包括以下步骤：a）获得黑木相思组培苗后，先进行15‑30天的增殖培养，得到增殖苗；b）转移增殖苗进行接种；c）接种的增殖苗培养25‑40天；d）切割增殖苗中高于2.0cm的单芽作为生根苗；e）接种生根苗，f）生根苗培养4‑24天；g）炼苗，时间为6‑26天。本发明标准化生产实现苗木产量的增加，改善苗木质量，提高生产效率，降低生产成本，推动黑木相思优良无性系规模化生产，实现黑木相思无性系林业高效培育。
一种相思组培苗标准化生产工艺

[实用新型]一种适宜开放式组培的培养瓶-CN201920519068.9有效
发明人：黄烈健;曾炳山 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2019-04-17 - 公布日： 2020-04-14 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种适宜开放式组培的培养瓶，包括透明塑料材质的瓶盖部分和设置在所述瓶盖部分下方的透明塑料材质的瓶身部分，所述瓶盖部分通过螺纹部与所述瓶身部分连接，所述螺纹部包括螺纹部一和螺纹部二，所述瓶盖部分的下端口设置有螺纹部一，所述瓶身部分的上端口设置有与所述螺纹部一相同规格的螺纹部二，所述瓶身部分底部设置有用于放置培养基的空间。本实用新型改变了现有的组培瓶的结构，使组培过程中的操作更加方便快捷，便于进行开放式组培；同时方便在试验后对培养瓶的清洗，并且储存时可以达到多个瓶盖部分依次叠放的效果，提高了空间利用率。
一种适宜开放式培养

[发明专利]一种相思开放式组培方法-CN201710207906.4有效
发明人：黄烈健;王鸿;曾炳山;吴友军 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2017-03-31 - 公布日： 2019-10-22 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开一种相思开放式组培方法。该方法包括如下步骤：取4～10月份当年生腋芽饱满枝条为外植体，消毒，然后在开放式芽诱导培养基中进行培养，得到腋芽；将腋芽在开放式生根培养基中进行开放式瓶内生根培养，得到生根苗；将生根苗剪成具有至少一个芽的小节为继代外植体，继续在开放式生根培养基中进行培养，连续多代生根实现增殖的目的。本发明使用的抑菌剂百菌清，成分简单、成本低、易于购买，0.2g·L^‑1即可达到良好抑菌效果，通过对外植体类型、消毒方式、外植体采集季节、芽诱导培养基等筛选研究，芽诱导率高达99.54％；生根率97.62％，连续多代生根的增殖倍数可达3.58，完全可满足工厂化生产需求。
一种相思开放式方法

[发明专利]一种檀香组织培养快速繁殖育苗方法-CN201710718937.6在审
发明人：刘英;曾炳山;裘珍飞 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2017-08-21 - 公布日： 2019-05-14 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种檀香组培快繁微扦插育苗方法，包括如下步骤，S1、萌芽条的培养；S2、外植体消毒；S3、丛芽诱导；S4、继代培养；S5、预生根培养；S6、炼苗培养；S7、微扦插移植。本发明以1/3轮伐期以上的种源试验林的优树为培养材料，组培快繁为基础，预生根瓶苗为切入点，通过调整大量元素配比、激素浓度及配比、蔗糖浓度、移植介基及配比、水分控制及养分补充、病害控制等系列技术方法，本发明提供了一套檀香微扦插生产配套技术，解决了檀香生根培养不生根和落叶死亡的问题，实现预生根培养45天后，98％的瓶苗高度达3.5cm以上，生长健壮不落叶；实现微扦插预生根瓶苗生根率达到60％以上；实现无性系组培苗木的规模化生产。
檀香生根培养配比瓶苗扦插生根组培快繁落叶移植规模化生产外植体消毒病害控制丛芽诱导大量元素继代培养快速繁殖培养材料配套技术扦插育苗水分控制养分补充种源试验组织培养轮伐期萌芽条切入点生根率无性系蔗糖炼苗优树组培激素育苗苗木生长死亡生产

[发明专利]一种郁闭林中火力楠外植体的消毒方法-CN201711255330.5在审
发明人：刘英;曾炳山;姜清彬 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2017-12-04 - 公布日： 2018-05-15 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种郁闭林中火力楠外植体的消毒方法，包括如下步骤：S1选取外植体采集的时间；S2选择外植体的采集长度；S3外植体的初步清洗；S4外植体消毒的合适长度选取；S5外植体的消毒；S6顶芽包片的剥离；S7接种外植体的剪取。本发明适用于郁闭林中火力楠的外植体消毒，对火力楠无性系选育研究和优良无性系的组培快繁及规模化生产具有重大的现实意义。
一种郁闭林中火力楠外植体消毒方法

[发明专利]一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法-CN201610299886.3有效
发明人：刘英;曾炳山 -专利权人：中国林业科学研究院热带林业研究所
申请日： 2016-05-09 - 公布日： 2017-12-08 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，包括如下步骤种子消毒、丛芽诱导、继代培养、生根培养、练苗培养、生根苗移植，其中，丛芽诱导培养基、继代基本培养基、生根基本培养基均经过改良，本发明通过调整五个大量元素配比、微量元素浓度、添加抗氧化剂等技术方法，解决了部分胚系苗木在0.7MS上，由于营养元素不平衡，苗木生长不良，甚至玻璃化、褐化死亡的问题，生产出1.5‑4.0cm高度的健壮苗木，实现高质量继代苗木生产，适应于多数种胚使用，减少壮苗培养环节，节约成本、同时实现了高效产业化生产，降低培养成本，减少管理难度及培养时间过长，苗木出现褐化死亡。移植成活率达90%以上。
一种火力组织培养快速繁殖育苗方法

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