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[发明专利]高产游离脂肪酸重组大肠杆菌菌株及其构建方法和用途-CN202110597779.X有效
发明人：宋浩;房立霞;曹英秀 -专利权人：天津大学
申请日： 2021-05-31 - 公布日： 2023-01-31 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了高产游离脂肪酸重组大肠杆菌菌株及其构建方法和用途，包括如下步骤：将tesA’和dcas9连接到YX212，构建质粒pCF并转化到菌株BL21(DE3)得到重组菌株CF；将ihfA‑Low、PBAD‑T1、NdeI‑aidB‑XhoI和ryfA‑Medium依次连接到Sg‑S，构建质粒Sg‑LihfA‑OaidB‑MryfA，继续连入gadA‑High，构建质粒Sg‑LihfA‑OaidB‑MryfA‑HgadA，将两质粒分别转化到菌株CF得到重组菌株LihfA‑OaidB‑MryfA和LihfA‑OaidB‑MryfA‑HgadA；本发明菌株可高效合成游离脂肪酸。方法简便。
高产游离脂肪酸重组大肠杆菌菌株及其构建方法用途

[发明专利]一种基于非同源末端连接机制的解脂耶氏酵母基因组整合的方法-CN202011089557.9有效
发明人： 曹英秀;白秋艳;程帅;张金来 -专利权人：天津大学
申请日： 2020-10-13 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于非同源末端连接机制的解脂耶氏酵母基因组整合的方法，将解脂耶氏酵母内源基因DL4和XRCC4，外源智人基因PAXX以rDNA位点整合的方式整合到解脂耶氏酵母ATCC201249菌株的基因组rDNA位点，得到重组菌株YNH01；将待转入基因表达盒与启动子截短到11bp的URA3营养标签U11连接，得到的连接片段转化到YNH01得到高压力筛选标签菌株；将连接片段转化到高压力筛选标签菌株，得到经过两轮转化的重组菌株；将连接片段再次转化到经过两轮转化的重组菌株，得到转入的基因高表达的菌株。本发明在短时间内获得大量的多样性菌株，实现了NHEJ整合技术在天然产物微生物合成中的高效应用。
一种基于同源末端连接机制解脂耶氏酵母基因组整合方法

[发明专利]一种产核黄素的重组海藻希瓦氏菌及在产电中的应用-CN202010478390.9有效
发明人：宋浩;陈媛媛;李锋;曹英秀 -专利权人：天津大学
申请日： 2020-05-29 - 公布日： 2022-03-29 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种产核黄素的重组海藻希瓦氏菌及在产电中的应用，该重组菌，用下述方法构建：(1)将黄素合成途径中的五个目的基因ribA，ribC，ribD，ribE，ribH连接到载体pyydt上，得到重组质粒R5；(2)将重组质粒R5，转入海藻希瓦氏Shewanella algae scs‑1 CGMCCNo.18696菌株，得到一种产核黄素的重组海藻希瓦氏菌scs‑R5。本发明的重组菌，电子传递体核黄素的产量高，从而增加其产电能力。
一种核黄素重组海藻希瓦氏菌中的应用

[发明专利]合成游离脂肪酸重组大肠杆菌菌株及其构建方法和用途-CN202010244552.2在审
发明人：宋浩;房立霞;曹英秀 -专利权人：天津大学
申请日： 2020-03-31 - 公布日： 2021-10-01 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了合成游离脂肪酸重组大肠杆菌菌株及其构建方法和用途，构建方法为：将tesA’基因和dcas9基因连接到质粒YX212，构建重组质粒pCF，将其转化大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌株CF；将ihfA‑Low片段与Sg‑S片段连接，构建重组质粒Sg‑LihfA，将其转化菌株CF，得到重组菌株LihfA；将PBAD‑T1片段和aidB基因依次连接到质粒Sg‑LihfA，构建重组质粒Sg‑LihfA‑OaidB，将其转化菌株CF，得到重组菌株LihfA‑OaidB。本发明构建的重组大肠杆菌菌株LihfA和LihfA‑OaidB通过调控与脂肪酸代谢非直接相关基因的表达高效合成游离脂肪酸。
合成游离脂肪酸重组大肠杆菌菌株及其构建方法用途

[发明专利]一种重组质粒以及重组希瓦氏菌和MFC产电的方法-CN201810344052.9有效
发明人：宋浩;林童;王磊;曹英秀 -专利权人：天津大学;海南大学
申请日： 2018-04-17 - 公布日： 2021-03-16 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明涉及生物能源技术领域，公开了一种重组质粒以及重组希瓦氏菌和MFC产电的方法。本发明选择适宜希瓦氏菌的启动子与外源电子载体flavins基因连接，使希瓦氏产生更多flavins，提高MFC电化学性能，同时结合突变菌株和孔蛋白oprF基因，可进一步提高生物膜形成和促进flavins在希瓦氏体内的进出，提高电子传递速率，更好的传递电子。更进一步，本发明使用了具有生物兼容性的氧化石墨烯(GO)，能与希瓦氏菌自组装成三维多层生物膜，进一步大大提高了生物膜的厚度和阳极生物载量，操作简便快捷，而且有效的提高了MFC电化学性能。
一种重组质粒以及希瓦氏菌 mfc 方法

[发明专利]糖代谢与脂质代谢协同提高解脂耶氏酵母合成脂肪酸衍生物的产量的应用-CN201910126150.X有效
发明人：元英进;张金来;曹英秀;晋聪聪;白秋艳;张若思;彭洋子;刘夺 -专利权人：天津大学
申请日： 2019-02-20 - 公布日： 2021-03-16 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及合成生物学技术领域，特别涉及糖代谢与脂质代谢在协同提高解脂耶氏酵母合成脂肪酸衍生物的产量的应用。协同脂肪醇与糖代谢路径的表达可以实现脂质产物生产与其他相关路径的平衡与协调从而促进细胞代谢的合理分配提高脂质合成效率。本发明通过实验发现当协同糖酵解与脂质产物生产路径时，可以实现有效的“拉‑推”效应，既脂质产物生产会拉动糖酵解表达上调，而糖酵解可以协同的进一步促进脂质产物合成基因的表达，从而大大的提高了整体代谢通量，实现了脂质类产物的高效生产。另一方面，协同表达也有利于实现动态调控，使得产物的生产可以依据细胞的不同代谢状态实时进行调整，从而进一步优化了细胞工厂的生产效率。
代谢协同提高解脂耶氏酵母合成脂肪酸衍生物产量应用

[发明专利]基因过表达及获得的菌株、应用-CN201810557890.4有效
发明人：宋浩;杨绍梅;曹英秀;张国银;蔡志刚 -专利权人：天津大学;赤峰制药股份有限公司
申请日： 2018-06-01 - 公布日： 2021-03-09 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别涉及基因过表达及获得的菌株、应用。枯草芽孢杆菌以甘油为碳源，依次经过莽草酸路径、甲基赤藓糖醇‑4‑磷酸(MEP)路径及甲基萘醌‑7(MK‑7)路径合成MK‑7。通过过表达MK‑7路径的基因menA及原位替换hepS‑menG‑hepT操纵子的启动子，以及MEP路径的dxs，dxr及yacM‑yacN，考察其对MK‑7合成的影响，确定影响MK‑7合成的限速步骤，为将来构建纳豆芽孢杆菌MK‑7的高产菌株提高基础研究和理论依据。
基因表达获得菌株应用

[发明专利]基因修饰的应用及其获得的菌株-CN201810557889.1有效
发明人：宋浩;杨绍梅;曹英秀;张国银;蔡志刚 -专利权人：天津大学;赤峰制药股份有限公司
申请日： 2018-06-01 - 公布日： 2021-02-09 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别涉及基因修饰的应用及其获得的菌株。本发明以实验室已构建的来源于B.subtilis 168的MK3‑MEP123为出发菌株，首先过表达甘油‑3‑磷酸脱氢酶(GlpD)，增加甘油‑3‑磷酸到二羟丙酮磷酸的转化，考察其对MK‑7合成的影响；其次敲除dhbB基因减少异分支酸的消耗，考察其对MK‑7合成的影响；最后通过2L摇瓶发酵，考察氧及碳氮源的供应对MK‑7合成的影响。为将来工业上通过代谢工程方法构建纳豆芽孢杆菌高产MK‑7菌株提供基础研究和理论依据。
基因修饰应用及其获得菌株

[发明专利]一种重组酵母菌株以及微生物混菌产电的方法-CN201711128925.4有效
发明人：宋浩;林童;白雪;曹英秀;李炳志;元英进 -专利权人：天津大学
申请日： 2017-11-15 - 公布日： 2020-12-18 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及生物能源技术领域，公开了一种重组酵母菌株以及微生物混菌产电的方法。本发明所述重组酵母菌株的PDC1、PDC5、PDC6、ADHI、ADH4基因被敲除，并插入LDH、XR、XDH和XKS基因。同时本发明构建了以葡萄糖和木糖为碳源的酵母‑希瓦氏混菌体系，通过改造酿酒酵母，使其能够代谢葡萄糖和木糖，产生乳酸，在MFC中为希瓦氏菌提高碳源和电子供体，不仅增加了希瓦氏菌可利用的碳源谱，而且在电化学效果上也表现出较佳性能，为人类对生物质的研究和新能源转化方式鉴定基础。
一种重组酵母菌株以及微生物混菌产电方法

[发明专利]一种重组菌株及其应用和制备9-氟甾体激素前体的方法-CN201710537992.5有效
发明人：宋浩;秦梦菲;孙鸿;曹英秀 -专利权人：天津大学
申请日： 2017-07-04 - 公布日： 2020-09-18 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种重组菌株及其应用和制备9‑氟甾体激素前体的方法。本发明所述重组菌株在分枝杆菌或大肠杆菌中转化有包含kstD、kstD3、kstDM中一种或两种以上基因的质粒；或在分枝杆菌或大肠杆菌基因组上整合有kstD、kstD3、kstDM中一种或两种以上基因。本发明通过引入外源基因kstD、kstD3和kstDM，构建重组分枝杆菌或大肠杆菌，并使用重组菌株细胞裂解液生产甾药前体，所获得的9β,11β‑环氧‑17α,21‑二羟基‑16β‑甲基孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮具有极高转化率，同时阐明了生物转化的反应机理，为将来的工业化生产提供理论依据。
一种重组菌株及其应用制备氟甾体激素方法

[发明专利]基因元件、表达载体及其应用-CN201610340212.3有效
发明人：元英进;曹英秀;肖文海;张金来;丁明珠 -专利权人：天津大学
申请日： 2016-05-20 - 公布日： 2019-12-31 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及合成生物学技术领域，特别涉及基因元件、表达载体及其应用。本专利提出一种提高脂肪烃微生物合成的新方法：通过动态平衡关键中间代谢物脂肪醛的积累和转化来提高大肠杆菌脂肪烃合成的能力。为了达到这个目的，本专利首先通过协同表达脂肪醇合成过程，通过竞争路径帮助ADO平衡脂肪醛的合成与转化；随后将与脂肪醛动态平衡相关的脂肪酸合成、脂质降解和电子传递三个模块与脂肪烃合成模块相适配，最终实现工程大肠杆菌高产脂肪烃的人工合成。
基因元件表达载体及其应用

[发明专利]基因过表达及获得的菌株、应用-CN201810557888.7在审
发明人：宋浩;杨绍梅;曹英秀;张国银;蔡志刚 -专利权人：天津大学;赤峰制药股份有限公司
申请日： 2018-06-01 - 公布日： 2018-10-30 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别涉及基因过表达及获得的菌株、应用。枯草芽孢杆菌以甘油为碳源，依次经过莽草酸路径、甲基赤藓糖醇‑4‑磷酸(MEP)路径及甲基萘醌‑7(MK‑7)路径合成MK‑7。通过过表达MK‑7路径的基因menA及原位替换hepS‑menG‑hepT操纵子的启动子，考察其对MK‑7合成的影响，确定影响MK‑7合成的限速步骤，为将来构建纳豆芽孢杆菌MK‑7的高产菌株提高基础研究和理论依据。
基因过表达菌株合成甲基赤藓糖醇枯草芽孢杆菌纳豆芽孢杆菌生物技术领域莽草酸路径高产菌株基础研究甲基萘醌路径合成限速步骤操纵子启动子甘油磷酸构建替换应用基因考察

[发明专利]基因及用途、基因元件、合成奇数中链脂肪醛的方法以及合成偶数中链脂肪烃的方法-CN201410566258.8在审
发明人：元英进;曹英秀;刘夺;丁明珠;谢泽雄;张金来 -专利权人：天津大学
申请日： 2014-10-22 - 公布日： 2016-05-18 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别涉及基因及用途、基因元件、合成奇数中链脂肪醛的方法以及合成偶数中链脂肪烃的方法。α-加双氧酶将前体物脂肪酸分子转化为重要中间代谢物——脂肪醛的过程为氧化反应，不需要细胞提供额外的还原力和能量，降低了细胞生产的负担；填补了脂肪醇产物链长仅为偶数，脂肪烃产物链长大多为奇数的技术局限，可以使生物基大宗化学品以及生物燃料的分子与石油基相关产品更为匹配。
基因用途元件合成奇数脂肪方法以及偶数

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