本发明公开一种CHO细胞内源性冷诱导RNA‑结合蛋白启动子核心序列及其应用。该核心序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过生物信息学方法分析了CIRP基因翻译起始位点上游1500bp的DNA序列,选择置信度较高的基因片区作为假想启动子;设计引物,从CHO细胞基因组中分别克隆获得目标基因序列,再亚克隆入适合的载体中使其驱动目的基因在CHO细胞中表达,比较在37℃和32℃温度条件下不同启动子的活性,获得最优启动子序列,分析其元件组成,获得核心序列。具有该核心序列的启动子在亚生理低温条件下培养48小时后表达强度分别为CMV启动子的0.8倍和1.2倍,是37℃条件下表达强度的4.5倍和4.6倍。
本发明公开了一种CHO细胞内源性的温度敏感型启动子及其应用。该启动子包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的CIRP‑P867启动子、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的CIRP‑P2588启动子和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的PDI‑P598启动子中的至少一种。该启动子具有如下优点:CHO内源性、无CpG岛、表达活性高且稳定、低温诱导水平高。因此,该启动子可用于蛋白表达。