本发明涉及基于HDR基因编辑方法培育短尾绵羊用核酸分子、试剂盒及方法和应用，属于细胞工程和基因工程技术领域。本发明提供了一种基于HDR基因编辑方法培育短尾绵羊用sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述sgRNA能够对绵羊TBXT基因进行精准突变的编辑，所获得的基因编辑绵羊及其后代的尾巴变短、尾椎数显著减低，同时原有的生产性能保持不变。
本发明提供了一种用于精准编辑绵羊OCT4基因的sgRNA、扩增用引物和应用，属于基因工程和细胞工程技术领域。一种用于精准编辑绵羊OCT4基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述sgRNA在敲除绵羊OCT4基因中的应用。本发明设计的OCT4‑sgRNA靶向OCT4基因第二外显子区域进行识别和删除。实验表明，将所述sgRNA通过基因编辑技术敲除绵羊OCT4基因，经过测序统计，基因编辑效率达到56.7％，与其他针对绵羊OCT4基因的sgRNA的基因编辑效率相比，具有显著优势，为后续研究绵羊OCT4基因在早期胚胎发育中的调控作用奠定基础。
本发明提供了一种实现绵羊FGF5基因精准突变的sgRNA、试剂盒和应用，属于基因编辑技术领域，所述sgRNA由SEQ ID No.1所示的正向引物和SEQ ID No.2所示的反向引物退火获得；所述试剂盒，包括所述的sgRNA、FGF5‑单链寡核苷酸ssODN、Cas9 mRNA和DNA连接酶IV抑制剂SCR7。本发明提供的sgRNA、试剂盒及方法能够实现绵羊FGF5基因的高效、精准突变；能够用于绵羊育种，应用前景好。
