本申请涉及Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体及其在制备L‑草铵膦中的应用。所述Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体当与包含SEQ ID NO.5所示序列的Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶的氨基酸序列比对时，所述Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体的氨基酸序列包含对应于第91位和/或第168位的氨基酸残基的替换，所述第91位和第168位是参照SEQ ID NO.5限定的，并且所述Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体的氨基酸序列与SEQ ID NO.5所示序列具有至少90％的同一性。
本申请涉及D‑氨基酸氧化酶突变体及其在制备L‑草铵膦中的应用。所述D‑氨基酸氧化酶突变体当与包含SEQ ID NO.1所示序列的D‑氨基酸氧化酶的氨基酸序列比对时，所述D‑氨基酸氧化酶突变体的氨基酸序列包含对应于第62位和/或第226位的氨基酸残基的替换，所述第62位和第226位是参照SEQ ID NO.1限定的，并且所述D‑氨基酸氧化酶突变体的氨基酸序列与SEQ ID NO.1所示序列具有至少90％的同一性。
本发明涉及一种SAC‑TRAIL融合蛋白及其制备方法和应用，利用柔性链接(G4S)3将抗肿瘤蛋白TRAIL融合到SAC蛋白的C末端，形成所述的SAC‑TRAIL融合蛋白，该融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；该融合蛋白的制备方法包括以下步骤：(1)构建pET28a/SUMO‑SAC‑TRAIL重组质粒；(2)利用大肠杆菌BL21(DE3)异源表达SUMO‑SAC‑TRAIL融合蛋白；(3)利用镍离子亲和层析和弱阳离子交换树脂高效分离纯化SAC‑TRAIL融合蛋白。与现有技术相比，本发明首次制备了SAC‑TRAIL融合蛋白，纯化蛋白的纯度达到94％，制备的蛋白药物SAC‑TRAIL能够有效抑制卵巢癌细胞SK‑OV‑3和乳腺癌细胞MCF‑7的增殖，IC50值分别为4.42ng/mL和0.053μg/mL。
