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[发明专利]应用于第二代高通量测序的全自动RNA文库制备装置-CN201611190715.3有效
发明人： 尚小云;李艳艳;张凯宁;靖相密;安苗苗 -专利权人：山东艾克韦生物技术有限公司
申请日： 2016-12-21 - 公布日： 2019-04-26 - 主分类号： C12M1/34 文献下载
摘要：本发明涉及一种应用于第二代高通量测序的全自动RNA文库制备装置。包括盒体，盒体的顶面上设置进样口、文库转移口，盒体底部分别设置1个文库收集池、1个样品池、9个试剂仓、1个废液槽，装置测序方法，步骤：将RNA文库构建所用到所有试剂都预先放入盒体底部的试剂仓中，RNA样品经反转录为cDNA、DNA片段化、末端修复、加接头、PCR扩增并纯化后，取样针把构建好的文库转移至文库收集池中，将盒体顶部的密封盖打开，通过文库转移口取出构建好的文库，然后就放到测序平台上进行测序。整个建库过程都在盒体内部完成，全程封闭，不与外界接触，不会产生污染，即使是本领域内的普通技术人员都能独立操作实施，提高了效率。
文库盒体构建高通量测序制备装置试剂仓收集池测序测序平台独立操作盒体顶部盒体内部末端修复全程封闭外界接触反转录废液槽进样口密封盖取样针样品池放入建库应用取出污染

[发明专利]基于碱基编辑靶向CD133的CAR-T细胞制备方法及应用-CN201910075914.7在审
发明人： 尚小云;蒋海娟;刘慧莹;马少文;沈慧;张锋;赵丹 -专利权人：苏州茂行生物科技有限公司
申请日： 2019-01-25 - 公布日： 2019-04-19 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于碱基编辑制备PD‑1基因敲除且靶向CD133的CAR‑T细胞制备方法及应用。通过BE‑Plus系统进行基因敲除的同时将表达白细胞分化抗原CD133‑CAR的质粒载体导入T细胞的制备方法，所得CAR‑T细胞可应用于制备抗肿瘤药物。本发明公开的PD‑1基因敲除且靶向CD133的CAR‑T细胞制备工艺简单，在肿瘤的细胞治疗中拥有较高的应用价值。
基因敲除靶向制备应用碱基白细胞分化抗原制备抗肿瘤药物细胞制备细胞治疗制备工艺质粒载体肿瘤

[发明专利]多重引物组及利用该引物组基于高通量测序构建人类T细胞免疫组库的方法-CN201811597549.8在审
发明人：李艳艳;尚小云;张金凤;马立敏;张通 -专利权人：山东艾克韦生物技术有限公司
申请日： 2018-12-26 - 公布日： 2019-04-02 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明公开了一种多重引物组及利用该引物组基于高通量测序构建人类T细胞免疫组库的方法，属于分子生物学检测领域。本发明的多重引物组，由一组上游引物和一条下游引物组成，所述上游引物由接头1、引物条码1、测序引物1、针对可变区V区设计的特异性引物V1‑V24串联而成；所述下游引物由接头2、引物条码2、测序引物2、针对恒定区C区设计的特异性引物Vc串联而成；引物条码1和引物条码2的序列不同；测序引物1与测序引物2序列相同。利用本发明方法可以基于DNA样本或RNA样本构建TCR免疫组库，高通量测序后可以得到几百万条TCR序列，能够全面覆盖TCR的多样性信息。且构建效率高，构建成本低。
构建测序引物条码引物高通量测序多重引物免疫组库特异性引物人类T细胞上游引物下游引物引物组串联分子生物学检测多样性信息全面覆盖恒定区可变区

[发明专利]一种靶向EGFR vⅢ的CAR-T细胞的制备方法及应用-CN201810801441.X在审
发明人：刘希;尚小云 -专利权人：苏州茂行生物科技有限公司
申请日： 2018-07-20 - 公布日： 2018-11-30 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：一种靶向EGFRvⅢ且经基因修饰的CAR‑T细胞的制备方法及应用，包括将靶向EGFRvⅢ的氨基酸序列密码子进行优化，使之更适合在人源宿主体内表达，制备CAR‑T细胞；以及利用单碱基编辑的方法敲除CAR‑T细胞上的PD‑1基因；或组合分泌白细胞介素12(IL‑12)，用于促进活化的T细胞增殖；或组合分泌anti‑PD1抗体，用于结合其他T细胞上的PD1，解除肿瘤组织对T细胞的抑制作用。本发明选用PiggyBac转座子系统提高了转染效率和导入基因的表达效率，并缩短操作时间，简化CAR‑T的制备程序，另外本发明敲除PD‑1基因时避免了使用病毒载体，安全性更高。
制备靶向敲除分泌宿主氨基酸序列白细胞介素表达效率病毒载体导入基因基因修饰体内表达肿瘤组织转染效率基因单碱基密码子活化抗体人源应用细胞优化

[发明专利]一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的CAR-T细胞的构建及其应用-CN201810856990.7在审
发明人： 尚小云 -专利权人：苏州茂行生物科技有限公司
申请日： 2018-07-31 - 公布日： 2018-11-23 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及肿瘤免疫领域，具体涉及一种靶向间皮素并携带PD‑Ll阻断剂的CAR‑T细胞的构建及其应用。本发明的CAR‑T细胞是通过将靶向间皮素并携带PD‑Ll阻断剂的嵌合抗原受体(CAR)转染至T细胞构建而成，其中靶向间皮素并携带PD‑Ll阻断剂的嵌合型抗原受体由CD8抗原的前导肽、抗间皮素单链抗体、铰链区、跨膜区、胞内信号域和抗PD‑L1抗体分泌区依次连接组成。本发明的CAR‑T细胞的间皮素SS1P scFv可以特异性的与表达间皮素糖蛋白的肿瘤细胞结合，促进抗肿瘤相关细胞因子的分泌，从而对这类肿瘤细胞产生杀伤效应；另外，本发明的CAR‑T细胞还能分泌PD‑L1抗体，特异性的与肿瘤细胞表达产生的PD‑L1相结合，阻断PD‑L1/PD‑1信号对T细胞活性的抑制效应，有利于CAR‑T长时间对肿瘤细胞生长产生有效的抑制。
阻断剂靶向构建携带肿瘤细胞分泌肿瘤细胞表达肿瘤细胞生长单链抗体抗体分泌抗原受体嵌合抗原杀伤效应细胞因子依次连接肿瘤免疫铰链区抗肿瘤跨膜区前导肽信号域抗体嵌合素糖转染应用蛋白细胞

[外观设计]激光阅读仪-CN201730621474.2有效
发明人： 尚小云;李艳艳;邱盟轩;王小平 -专利权人：山东艾克韦生物技术有限公司
申请日： 2017-12-08 - 公布日： 2018-10-12 - 主分类号： 10-05 文献下载
摘要：1．本外观设计产品的名称：激光阅读仪。2．本外观设计产品的用途：本外观设计产品用于读取PCR产物杂交检测的荧光信号。3．本外观设计产品的设计要点：形状、图案及其结合。4．最能表明本外观设计设计要点的图片或照片：立体图。5．省略视图：其他视图无设计要点，故省略。
外观设计阅读仪省略激光读取荧光信号杂交检测图案图片

[发明专利]基于核酸质谱技术检测结直肠癌驱动基因及易感SNP的方法-CN201710984508.3在审
发明人：雷菁;赵双双;尚小云;张轶;刁波 -专利权人：武汉赛云博生物科技有限公司
申请日： 2017-10-20 - 公布日： 2018-01-09 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明涉及基因检测领域，具体涉及一种基于核酸质谱技术检测结直肠癌驱动基因及易感SNP的方法。本发明通过对结直肠癌全基因组测序分析以及对GWAS研究中亚洲人群阳性样本分析，筛选与亚洲人群罹患肺癌风险显著相关的、功能独立的25个CRC热点突变位点和22个SNP位点用于评估个体罹患CRC的风险。本发明通过核酸质谱技术对SNP和热点变异位点进行检测，相比于TaqMan‑PCR和二代平台测序，该检测方法具有简便、灵活性强，高通量大、成本低等特点。本发明除可用于CRC的早期评估和大规模筛查，为CRC的患病风险评估、诊断提供重要参考依据，以实现对结直肠癌疾病的早期预警，同时还可以根据检测结果对CRC患者进行个性化治疗。
基于核酸技术检测直肠癌驱动基因 snp 方法

[发明专利]基于核酸质谱技术检测乳腺癌早期诊断相关基因的方法-CN201710998558.7在审
发明人： 尚小云;曾祺森;张轶;雷菁;刁波 -专利权人：武汉赛云博生物科技有限公司
申请日： 2017-10-20 - 公布日： 2017-12-29 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明属于基因检测领域，具体涉及一种基于核酸质谱技术检测乳腺癌早期诊断相关基因的方法。本发明提供4个基因的15个与乳腺癌相关的突变位点和10个基因的18个乳腺癌易感SNP位点的组合检测方法，利用SequenomMassARRAYSNP基因型分析技术对乳腺癌易感基因的SNP位点和与乳腺癌相关的基因突变位点进行基因分型检测。该方法对于乳腺癌的早期筛查更准确、技术重现性好、性价比高；相较于TaqMan‑PCR及二代平台测序的SNP检测，具有设计灵活、准确性高、检测位点样本量大、成本低等优点，可同时对数十个SNP位点进行数百至数千份样本检测。
基于核酸技术检测乳腺癌早期诊断相关基因方法

[发明专利]一种用于肺癌驱动基因及易感基因早筛的核酸质谱检测方法-CN201710984492.6在审
发明人： 尚小云;刘慧莹;雷菁;刁波 -专利权人：武汉赛云博生物科技有限公司
申请日： 2017-10-20 - 公布日： 2017-12-26 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明属于基因检测领域，具体涉及一种用于肺癌驱动基因及易感基因早筛的核酸质谱检测方法。本发明的检测方法考虑了亚洲人与欧美人群肺癌基因谱的差异性，选择了与亚洲人群罹患肺癌风险显著相关的29个肺癌热点突变和20个单核苷酸多态性位点并进行组合，检测的驱动基因和易感基因更前沿，并纳入了多个与肺癌易感和靶向治疗耐药相关的位点，并且彼此独立，不存在连锁不平衡，因此本发明的位点选择具有代表性、独立性和风险值可积累性，可用于评估个体罹患肺癌的风险；本发明的检测技术价格优势明显，在肺癌早筛检测方面的灵敏度更高，通量更大，可实现单个小样本多基因的检测，满足小样本最大化使用，可转化研究应用于临床。
一种用于肺癌驱动基因核酸检测方法

[发明专利]基于碱基编辑的基因敲除方法及其应用-CN201710437122.0在审
发明人：李广磊;尚小云;张琳琳 -专利权人：王小平
申请日： 2017-06-12 - 公布日： 2017-09-15 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：基于碱基编辑的基因敲除方法及其应用。该基因敲除方法包括选定待敲除基因的编码区的20bp–NGG目标序列，使其包含完整的目标密码子CAA、CAG或CGA；利用sgRNA序列来将BE3定位到目标序列以使目标密码子中的目标单碱基C变成T从而相应引入终止密码子TAA或TAG、TGA以实现基因敲除，其中目标单碱基C优选位于目标序列的第4‑8位，目标密码子与NGG间隔12‑14bp,并且目标密码子的上游紧邻碱基(H)不能为G；所述sgRNA序列为与目标序列互补对应的20bp序列。本发明的敲除方法更高效、更精确以及更少脱靶效应。
基于碱基编辑基因方法及其应用

[发明专利]无物种限制的真核生物同时进行基因敲除和基因过表达-CN201710539383.3在审
发明人：张琳琳;李广磊;尚小云 -专利权人：王小平
申请日： 2017-07-04 - 公布日： 2017-09-15 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：无物种限制的真核生物同时进行基因敲除和基因过表达，包括将至少一个CAR构建于同一载体，并用同一个启动子驱动表达，并且不同CAR之间利用2A短肽分开；和/或将至少一个sgRNA构建于同一载体，不同sgRNA分别用启动子U6驱动表达，并且不同的U6‑sgRNA串联在一起；将所述载体电转染导入同一细胞或个体，其中所述至少一个CAR在同一细胞或个体同时实现基因过表达，所述至少一个sgRNA在同一细胞或个体同时实现基因敲除。本发明通过构建一个载体，利用不同的启动子同时过表达某种基因，实现了在同一细胞或同一个体同时过表达基因和敲除基因的目的。
物种限制生物同时进行基因表达

[实用新型]一种用于B细胞白血病微小残留病检测的试剂盒-CN201720025086.2有效
发明人：刘聪;雷菁;赵双双;尚小云 -专利权人：武汉赛云博生物科技有限公司
申请日： 2017-01-10 - 公布日： 2017-09-08 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种用于B细胞白血病微小残留病检测的试剂盒，包括盒体，所述盒体上铰接有盒盖，所述盒体内设有放置腔，所述放置腔内设有冷藏盒，所述放置腔内相对的侧壁上均设有固定板，所述固定板上设有第一连接件，所述第一连接件上铰接有气缸，所述盒盖的一侧设有两个相互平行的第二连接件，所述气缸的活塞杆末端铰接在第二连接件上，所述冷藏盒内设有移动块，所述移动块内设有空腔，所述空腔中设有驱动装置，所述驱动装置的输出轴上设有第一齿轮。本实用新型通过气缸、驱动装置以及折叠板的结合实现了对试剂盒自动打开的功能，同时放置板以及减震弹簧等的设置不仅方便了操作，还起到减震的作用，保护了里边的试剂瓶，适宜推广。
一种用于细胞白血病微小残留检测试剂盒

[发明专利]PD‑1敲除CD19CAR‑T细胞的制备-CN201710539385.2在审
发明人： 尚小云;张琳琳;李广磊 -专利权人：王小平
申请日： 2017-07-04 - 公布日： 2017-09-01 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：PD‑1敲除CD19CAR‑T细胞的制备，包括将CD19CAR质粒及其转座酶质粒、用于敲除PD‑1基因的sgRNA质粒及CAS9质粒与电转试剂混合，加入PBMC细胞中进行电转染；采用偶联CD3或CD3+CD28抗体的磁珠富集CD3阳性T细胞；以及筛选并培养扩增转染后的T细胞以获得PD‑1敲除CD19CAR‑T细胞。本发明选用PiggyBac转座子系统提高了转染效率和转基因的表达效率和时间，简化CART的制备程序，增强了系统的负载量。另外，本发明敲除PD‑1基因时避免了使用病毒载体，安全性更高。
pd cd19car 细胞制备

[实用新型]一种高效刺激活化中心记忆T细胞的试剂盒-CN201720024672.5有效
发明人：刘慧莹;雷菁;尚小云 -专利权人：武汉赛云博生物科技有限公司
申请日： 2017-01-10 - 公布日： 2017-08-22 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种高效刺激活化中心记忆T细胞的试剂盒，包括盒体，所述盒体上铰接有盒盖，所述盒体内设有第一凹槽、第二凹槽、第三凹槽、第四凹槽、第五凹槽、第六凹槽、第七凹槽，所述第一凹槽和第二凹槽内设有第一细胞培养液试剂瓶，所诉第三凹槽内设有第二细胞培养液试剂瓶，所述第四凹槽内设有细胞培养添加试剂瓶，所述第五凹槽内设有细胞激活添加试剂瓶，所述第六凹槽内设有第一细胞因子添加试剂瓶。本实用新型提供的试剂盒只需要20mL‑80mL的外周血，或者2X107‑5X107个细胞即可，对人几乎无影响，试剂盒使用方便、可操作性强，组分明确，流程简单，经济实用，利用其刺激活活的中心记忆T细胞，可用于临床前研究或入库保存。
一种高效刺激活化中心记忆细胞试剂盒

[发明专利]一种制备分泌IL‑12CD19CAR‑T细胞的方法-CN201710287052.5在审
发明人： 尚小云 -专利权人： 尚小云
申请日： 2017-04-27 - 公布日： 2017-07-04 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及免疫学和分子生物学T淋巴细胞技术领域，尤其涉及一种制备分泌IL‑12 CD19 CAR‑T细胞的方法。具体步骤为制备一种抗CD19嵌合抗原受体和分泌IL‑12的质粒，将这两种质粒、转座酶质粒与电转试剂混合，加入PBMC细胞中电转染，然后采用偶联CD3/CD/28抗体的磁珠富集CD3阳性T细胞，筛选并培养扩增转染后的T细胞制备分泌IL‑12 CD19 CAR‑T细胞。本发明采用第三代CAR，使用PiggyBac转座子系统电转染提高了转染效率和转基因表达效率，同时，采用人自身EF1α启动子制备抗CD19嵌合抗原受体，使CAR基因在人体内长时间持续表达；本发明所制备的T细胞还能分泌IL‑12，利于T细胞和NK细胞的活化。因此，本发明提供了一种制备效率更高、工艺相对简单、可塑性高、安全性好的分泌IL‑12的CD19 CAR‑T细胞制备方法。
一种制备分泌 il 12 cd19car 细胞方法