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[发明专利]一种用高效液相色谱制备重组人碱性成纤维细胞因子的方法-CN202310769871.9在审
发明人：朱文瑾;李洽民;李洽君;陈平 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2023-06-28 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C07K14/50 文献下载
摘要：本发明涉及生物医药的分离技术领域，具体涉及一种用高效液相色谱制备重组人碱性成纤维细胞因子的方法。本发明通过将发酵离心收集的胞内可溶性分泌表达bFGF的大肠杆菌，破碎菌体，离心去除沉淀，通过向离心上清液中，添加碱性阳离子聚合物结合带负电荷的分子形成沉淀，离心去除沉淀，依次通过HPLC‑疏水作用层析和阳离子交换吸附层析、阴离子交换柱穿层析。本发明的依次组合的纯化方式，比使用亲和层析方法，更能有效的去除bFGF的聚合体，提高bFGF的比活性，同时具有的分离速度快，能快速提高产能，降低人工成本和场地使用成本，适用于大规模的工业生产。
一种高效色谱制备重组碱性纤维细胞因子方法

[发明专利]一种高纯度重组胰蛋白酶的制备方法-CN202310508204.5在审
发明人：朱文瑾;李浛民;李浛君;陈平 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2023-05-08 - 公布日： 2023-09-05 - 主分类号： C12N9/76 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，涉及一种高纯度重组胰蛋白酶的制备方法。本发明先对表达重组胰蛋白酶原的发酵液进行活化，然后依次采用疏水作用层析和阳离子交换层析，依次组合的纯化方式极为有效的去除重组胰蛋白酶的相关杂蛋白及减少a‑胰蛋白酶的含量，最终分离得到的重组胰蛋白酶中β‑胰蛋白酶的含量≥90％，a‑胰蛋白酶的含量≤10％，重组胰蛋白酶的比活性≥6000U/mg，优于2020版《中国药典》重组胰蛋白酶的质量标准。
一种纯度重组胰蛋白酶制备方法

[发明专利]一种高效液相色谱制备高纯度重组人干扰素α2b的方法-CN202310109601.5在审
发明人：朱文瑾;李浛民;李浛君;陈平 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2023-02-14 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C07K14/56 文献下载
摘要：本发明属于生物医药技术领域，涉及一种高效液相色谱制备高纯度重组人干扰素α2b的方法，包括以下步骤：重组人干扰素α2b的菌体破碎获得包涵体，洗涤包涵体，包涵体变性溶解得到变性溶解液，变性溶解液稀释复性得到复性液，复性液浓缩得到浓缩液，再经疏水作用层析分离和阴离子交换层析分离，得到高纯度重组人干扰素α2b。本发明通过依次组合的两步高效液相色谱柱精纯化方式有效并能快速去除重组人干扰素α2b的相关杂蛋白及干扰素的异构体和多聚体，快速提高生产力的同时，得到的重组人干扰素α2b纯度大、比活性高，内毒素小于0.25EU/1000万IU，保证了重组人干扰素α2b在临床上的疗效和使用安全。
一种高效色谱制备纯度重组干扰素方法

[发明专利]一种分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法-CN202310109602.X在审
发明人：朱文瑾;李浛民;李浛君;陈平 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2023-02-14 - 公布日： 2023-07-28 - 主分类号： C07K14/56 文献下载
摘要：本发明属于生物医药技术领域，涉及一种分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法，包括以下步骤：大肠杆菌表达的重组人干扰素α2b发酵液经过菌体收集、匀浆破菌获得包涵体，包涵体经洗涤、变性溶解及稀释复性，再进行浓缩，所述浓缩包括：吸附剂前处理；复性液前处理；往前处理后的吸附剂中加入pH为2～3的水匀浆，然后加入前处理后的复性剂，搅拌吸附5～50min，置于0～6℃下放置1～5h，收集沉淀，沉淀倒入布氏漏斗中，抽真空，采用洗脱液1洗脱，流出液不收集，然后用洗脱液2淋洗，收集流出液。本发明的浓缩方法可以快速达到浓缩目的，提高蛋白收率，还能有效去除复性沉淀、悬浮物、大分子粘稠的核糖核酸、疏水弱的杂蛋白等。
一种分离浓缩重组干扰素复性方法

[发明专利]一种高纯度重组水蛭素的纯化方法-CN202110279339.X有效
发明人：朱文瑾;李浛君;陈平;李浛民 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2021-03-16 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C07K14/815 文献下载
摘要：本发明涉及生物医药的分离技术领域，具体涉及一种高纯度重组水蛭素的纯化方法，取重组水蛭素发酵液，经过预处理后，先采用疏水色谱分离，收集重组水蛭素洗脱液I，再采用阴离子交换色谱进行分离，收集重组水蛭素洗脱液II，干燥，得到高纯度重组水蛭素，其中，疏水色谱以苯基键合硅胶为固定相，以盐溶液为流动相。本发明结合疏水层析和阴离子交换层析两种液相色谱，通过梯度洗脱实现重组水蛭素与杂质组分的分离，有效去除重组水蛭素发酵液中的内毒素和宿主蛋白，制得高纯度高比活的重组水蛭素，本发明的方法选择性好、分辨率高、分离速度快，避免了有机溶剂对人体和环境的危害，降低了成本，稳定性和安全性好，适用于大规模工业化生产。
一种纯度重组水蛭纯化方法

[发明专利]一种游离吸附浓缩重组表皮生长因子的方法-CN202011173896.5有效
发明人：朱文瑾;李浛民;陈平;李浛君 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2020-10-28 - 公布日： 2023-06-13 - 主分类号： C07K14/485 文献下载
摘要：本发明涉及一种游离吸附浓缩重组表皮生长因子的方法，属于生物医药技术领域。本发明游离吸附浓缩发酵液中重组表皮生长因子的方法包括如下步骤：S1、对重组表皮生长因子的发酵液进行预处理，然后加入反相高效液相色谱填料，进行搅拌游离吸附，使重组表皮生长因子吸附在反相高效色谱填料上，形成吸附填料，待吸附填料沉降后去掉上层液，收集吸附填料；S2、用洗脱液对吸附填料进行洗脱，并收集流岀液，即为重组表皮生长因子浓缩液。本发明的方法工艺简便快速、步骤少、易于工业化放大等特点，产品活性、纯度均较高。
一种游离吸附浓缩重组表皮生长因子方法

[发明专利]一种快速分离重组表皮生长因子发酵液中色素的方法-CN202011171039.1有效
发明人：朱文瑾;李浛民;陈平;李浛君 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2020-10-28 - 公布日： 2023-03-24 - 主分类号： C07K14/485 文献下载
摘要：本发明涉及一种快速分离重组表皮生长因子发酵液中色素的方法，属于生物医药技术领域。本发明快速分离重组表皮生长因子发酵液中色素的方法包括如下步骤：对重组表皮生长因子的发酵液进行预处理，然后加入疏水高效液相色谱填料，随后进行搅拌游离吸附，使重组表皮生长因子吸附在疏水高效液相色谱填料上，形成吸附填料，待吸附填料沉降后去掉上层液，收集吸附填料；采用流动相Ⅰ洗脱吸附填料至无色素流出，然后采用流动相Ⅱ继续对吸附填料进行洗脱并收集流出液，即得到去除色素的重组表皮生长因子；本发明分离重组表皮生长因子发酵液中色素的方法，工艺简便快速、步骤少、易于工业化放大等特点，产品活性、纯度均较高。
一种快速分离重组表皮生长因子发酵色素方法

[发明专利]一种高效液相色谱法制备高纯度重组表皮生长因子的工艺-CN202011173853.7有效
发明人：朱文瑾;李浛民;陈平;李浛君 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2020-10-28 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C07K14/485 文献下载
摘要：本发明涉及一种高效液相色谱法制备高纯度重组表皮生长因子的工艺，属于生物医药技术领域。本发明高效液相色谱法制备高纯度重组表皮生长因子的工艺包括如下步骤：S1、粗纯处理：将重组表皮生长因子的发酵液加入到疏水高效液相色谱柱进行吸附和洗脱，收集洗脱液即为粗纯产物；S2、精纯处理：将粗纯产物加入到弱阴离子高效液相色谱柱中进行吸附和洗脱，收集洗脱液即为高纯度重组表皮生长因子；本发明采用两步高效液相色谱柱处理的方法对重组表皮生长因子进行精纯处理，可有效去除重组表皮生长因子发酵液中的各种杂质，得到高比活性、高纯度的表皮生长因子。
一种高效色谱法制纯度重组表皮生长因子工艺

[发明专利]一种无内毒素的水蛭素抗凝血真空采血管及其制备方法-CN202110279178.4有效
发明人：朱文瑾;李浛君;陈平;李浛民 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2021-03-16 - 公布日： 2023-02-10 - 主分类号： A61B5/154 文献下载
摘要：本发明涉及医疗器械技术领域，具体涉及一种无内毒素水蛭素抗凝真空采血管及其制备方法，在真空采血管的内壁上涂有重组水蛭素，每100μg重组水蛭素中内毒素含量＜0.25EU/ml，其中，重组水蛭素为采用阴离子交换色谱法对重组水蛭素蛋白液进行分离得到，包括如下步骤：进样：取重组水蛭素蛋白溶液进样，进样量为色谱柱最大载样量的25～40％，用平衡液冲洗进行柱平衡；洗脱：用洗脱液进行等度洗脱，并收集流出部分，得到重组水蛭素洗脱液；柱再生：用再生液进行等度洗脱，并收集流出部分，得到内毒素洗脱液。本发明真空采血管内壁喷涂去除内毒素的水蛭素，可提高血液检测的准确性，特别适用于血液样品中含致热源的特殊项目检测要求，安全可靠。
一种内毒素水蛭抗凝真空血管及其制备方法

[发明专利]一种去除重组水蛭素蛋白溶液中内毒素的方法-CN202110279177.X有效
发明人：朱文瑾;李浛君;陈平;李浛民 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2021-03-16 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C07K14/815 文献下载
摘要：本发明涉及生物医药的分离纯化技术领域，具体涉及一种去除重组水蛭素蛋白溶液中内毒素的方法，采用阴离子交换色谱法进行分离，包括如下步骤：进样：取重组水蛭素蛋白溶液进样，进样量为色谱柱最大载样量的25～40％，用平衡液冲洗进行柱平衡；洗脱：用洗脱液进行等度洗脱，并收集流出部分，得到重组水蛭素洗脱液；柱再生：用再生液进行等度洗脱，并收集流出部分，得到内毒素洗脱液。本发明根据重组水蛭素和内毒素在中性条件下与阴离子交换剂吸附作用的强弱，通过增加流动相中的盐浓度进行等度洗脱，通过进样量的调控来实现良好的去除效果，保证了较高的蛋白回收率，同时实现了色谱柱的再生，该方法简单、高效、成本低，适用于工业化生产。
一种去除重组水蛭蛋白溶液内毒素方法

[发明专利]一种分离分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的方法-CN202211107455.4在审
发明人：朱文瑾;李含君;李含民;陈平 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2022-09-13 - 公布日： 2022-12-13 - 主分类号： C07K14/81 文献下载
摘要：本发明属于生物医药技术领域，涉及一种分离分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的方法，所述分离分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的方法包括SLPI发酵液经酸沉处理、HPLC疏水作用色谱分离和HPLC阳离子交换吸附分离步骤。本分离方法具有纯化周期短，纯化步骤简单，高纯度，高收率，低成本，绿色环保，适用于工业放大生产。
一种分离分泌白细胞蛋白酶抑制因子方法

[发明专利]一种制备型高效液相色谱纯化乳酸链球菌素的方法-CN202110072760.3有效
发明人：朱文瑾;李浛君;陈平;李浛民 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2021-01-20 - 公布日： 2022-10-14 - 主分类号： C07K14/315 文献下载
摘要：本发明属于生物医药的分离技术领域，具体涉及一种制备型高效液相色谱纯化乳酸链球菌素的方法。本发明中纯化乳酸链球菌素的方法包括：取Nisin粗品，先以苯基键合硅胶为固定相进行疏水层析，再以羧基键合硅胶为固定相进行弱阳离子层析，分离得到高纯度Nisin。本发明对盐析后的乳酸链球菌素粗纯液分别进行疏水层析和弱阳离子层析，仅通过三个步骤实现高纯度Nisin的制备，在提高乳酸链球菌素纯度的同时减少多肽的失活率，乳酸链球菌素的总活性回收率可达到75％以上，本发明两种层析方法的结合改善乳酸链球菌素的提纯效果，选择性好、分辨率高、分离速度快，且所用的层析色谱柱无需强酸强碱再生，绿色环保，色谱柱使用寿命长，从而可降低工业化生产成本。
一种制备高效色谱纯化乳酸链球菌素方法

[发明专利]一种游离吸附浓缩重组白介素-2复性液的方法-CN202010591717.3有效
发明人：朱文瑾;李浛民;陈平 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2020-06-24 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C07K14/55 文献下载
摘要：本发明涉及一种游离吸附浓缩重组白介素‑2复性液的方法，属于生物医药技术领域。本发明去游离吸附浓缩重组白介素‑2复性液的方法包括如下步骤：从重组白介素‑2发酵液中提取包涵体，将包涵体裂解，获得包涵体裂解液；将包涵体裂解液进行复性处理，得到复性液；在复性液中加入疏水高效液相色谱填料进行搅拌游离吸附，待填料沉降后去掉上层液，收集吸附有重组白介素‑2的色谱填料；用洗脱液对吸附有重组白介素‑2的色谱填料进行洗脱，并收集流岀液，所述流出液即为重组白介素‑2复性浓缩液；本发明游离吸附浓缩重组白介素‑2复性液的方法方便易行，回收率和产品活性均较高。
一种游离吸附浓缩重组白介素复性方法

[发明专利]一种去除乳酸链球菌素色素和异味的可再生色谱系统及方法-CN202110072666.8在审
发明人：朱文瑾;李浛君;陈平;李浛民 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2021-01-20 - 公布日： 2021-06-15 - 主分类号： B01D15/26 文献下载
摘要：本发明涉及天然食品防腐剂的分离技术领域，具体涉及一种去除乳酸链球菌素色素和异味的可再生色谱系统及方法。所述色谱系统包括进液系统、高压输液泵、混合器、过滤保护柱、色谱柱、检测器、出液系统；本发明基于乳酸链球菌发酵液中不同组分和疏水基团之间作用力不同实现分离，先将低离子强度的乳酸链球菌发酵液调至酸性，采用高流速动力使吸附作用力弱的Nisin快速流出色谱柱，而色素和异味物质吸附于介质表面，通过再生液洗脱进行解离。本发明方法克服了传统工艺的缺点，提高了食品级乳酸链球菌素的口感和质量，可实现快速和高效的分离，且无有机溶剂的残留，绿色环保，色谱柱使用寿命长，生产成本低。
一种去除乳酸链球菌素色素异味再生色谱系统方法

[发明专利]一种去除重组白介素-2内毒素的方法-CN202010592544.7在审
发明人：朱文瑾;李浛民;陈平 -专利权人： 宁波博睿瀚达生物科技有限公司
申请日： 2020-06-24 - 公布日： 2020-10-20 - 主分类号： C07K14/55 文献下载
摘要：本发明涉及一种去除重组白介素‑2内毒素的方法，属于生物医药技术领域。本发明去除重组白介素‑2内毒素的方法包括如下步骤：在pH为7.0～7.5的重组白介素‑2样品Ⅰ中添加阴离子助溶剂十二烷基硫酸钠(SDS)，混匀形成重组白介素‑2样品Ⅱ；在重组白介素‑2样品Ⅱ中加入氯化钠至其浓度为0.8～1.2mol/L，形成重组白介素‑2样品Ⅲ，将所述重组白介素‑2样品Ⅲ通过弱阴离子高效液相色谱柱进行动态吸附；采用平衡液对弱阴离子高效液相色谱柱进行第一次洗脱，所述平衡液中含有浓度为0.8～1.2mol/L的氯化钠，然后采用洗脱液进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液，本发明去除重组白介素‑2内毒素的方法具有内毒素去除效率高、回收率高的优点。
一种去除重组白介素内毒素方法

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