本发明公开了一种竞争性靶向RNA发卡环结构的环肽抑制剂及其应用,所述竞争性靶向RNA发卡环结构的环肽抑制剂包括如下中的一种:L22#15:氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;L22#09:氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;L22#13:氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示;且所述环肽抑制剂通过各自所述氨基酸的第1位的Cys和第14位的Cys形成二硫键成环。本发明提供的一竞争性靶向RNA发卡环结构的环肽抑制剂,以高亲和力结合于靶标ψ‑RNA的茎环3结构,同时可以竞争性的抑制核衣壳蛋白与RNA的结合,对特异性靶向新药的开发有重要的作用。