本发明公开了一种牛传染性鼻气管炎病毒gD单克隆抗体、检测试剂盒和应用,具体涉及生物技术领域。所述牛传染性鼻气管炎病毒gD单克隆抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。所述轻链可变区氨基酸序列由轻链可变区的核苷酸序列编码而成,如SEQ ID NO:3所示;所述重链可变区氨基酸序列由重链可变区的核苷酸序列编码而成,如SEQ ID NO:4所示。本发明利用血清为检测对象,以其中的牛传染性鼻气管炎病毒或牛疱疹病毒I型特异性牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白为检测指标,利用阻断ELISA方法,实现了牛传染性鼻气管炎的简便检测和诊断,适用性广,有助于进一步推进我国牛传染性鼻气管炎的净化,提升养殖效益。