本发明涉及基因工程技术领域,尤其涉及一种融合蛋白,基于该融合蛋白的编码多核苷酸、表达载体、工程菌和应用。本发明的融合蛋白至少由引导肽、促表达肽、酶切位点片段和胰岛素前体依次连接而成,促表达肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。基于本发明的融合蛋白构建的重组工程菌可以显著提高融合蛋白在大肠杆菌中表达量,从而实现长效酰化胰岛素衍生物的产业化生产应用,商业应用前景广阔。同时,基于本发明的充足工程菌,提出一种制备长效酰化胰岛素衍生物的方法,制备得到的长效酰化胰岛素衍生物具备一周使用一次的潜力,且降糖效果显著。