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[实用新型]一种用于神经干细胞大规模培养消化的装置-CN202223487280.2有效
发明人：张宏君;陈小威;杨印祥;周莹;张文营;穆乾;郭迎 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2022-12-27 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种用于神经干细胞大规模培养消化的装置，液体存储空间包括第一注射器和第二注射器，第一注射器和第二注射器包括管体，管体顶部设有注射头，管体后部设有推进杆，管体内设有腔体，第一注射器的腔体内设有需要消化的细胞液，第二注射器的腔体内设有消化液，医用三通阀的第一通路连接第一注射器，医用三通阀的第二通路连接第二注射器。通过注射器连接通路的消化装置解决了在细胞培养过程中收集大批量细胞离心后加入消化酶进行消化的移液枪体量不足的问题，且在注射器中进行消化细胞减少与外界的接触，降低细胞污染风险。运用注射器进行细胞吹打消化同时还可以适用于注射泵进行吹打消化，增强了细胞吹打过程中的稳定性和均一性。
一种用于神经干细胞大规模培养消化装置

[发明专利]SD大鼠永久脑缺血模型的建立方法及行为学检测方法-CN202211682487.7在审
发明人：刘鹏;孙晓东;王培培;王楠;李明煜 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2022-12-27 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： A01K67/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种SD大鼠永久脑缺血模型的建立方法：使用头端直径为0.40±0.02mm的尼龙线栓，生理盐水浸泡0.5小时，通过大鼠颈外动脉创口插入，并经过颈内动脉进入大鼠大脑中动脉，从而堵塞中动脉前端完成大鼠永久脑缺血模型。本发明还公开了一种SD大鼠永久脑缺血模型的行为学检测方法：在造模后1周、4周、6周、8周、10周、12周、16周，检测模型组大鼠的行为学；所述行为学的检测项目包括除粘、网格、转棒、圆筒、mNSS、水迷宫等。本发明建立的SD大鼠永久脑缺血模型，梗死体积稳定，死亡率低，脑梗死范围均一，本发明提供的行为学检测方法，可有效检测模型长期的行为学变化。
sd 大鼠永久缺血模型建立方法行为学检测

[发明专利]OGD模型及在鉴定神经干细胞的有效性中的应用-CN202211682469.9在审
发明人：李明煜;王培培;王楠 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2022-12-27 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种OGD模型，其构建方法为：利用鼠神经生长因子NGF刺激PC12细胞，将其诱导为交感神经元样细胞；然后利用无糖DMEM进行氧‑葡萄糖剥夺构建OGD模型，体外模拟神经元缺血性损伤。所述OGD模型在鉴定用于移植治疗的神经干细胞的有效性中的应用。本发明构建的OGD模型可以鉴定神经干细胞移植治疗的有效性和神经保护功能，本发明将OGD模型与NSC进行共培养，通过观察PC12细胞的形态及检测PC12细胞的存活率来分析NSC对凋亡的PC12细胞的作用及作用机理，从而进一步为NSC移植治疗神经系统疾病提供相应的实验和理论依据，为临床研究神经干细胞移植治疗提供了有效的基础依据。
ogd 模型鉴定神经干细胞有效性中的应用

[发明专利]一种神经干细胞的细胞运输保护液-CN202211684247.0在审
发明人：杨敏;陈小威;刘使君;刘昌明;朱紫薇;宁文洁;张换红;郭红玉 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2022-12-27 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种神经干细胞的细胞运输保护液，包括细胞运输保护液试剂；细胞运输保护液试剂包括人血白蛋白和葡萄糖注射液，所述的葡萄糖注射液为5份至10份，所述的人血白蛋白为20份至45份，本发明带来的有益效果是：是一款针对于神经干细胞制剂发明的细胞运输保护液，解决了神经干细胞运输保护液短缺，为其他研究神经干细胞提供技术支持；同时，本发明的细胞运输保护液，成分简单且安全，成本低，48小时超长保护细胞制剂，在48小时后，仍能保持神经干细胞生物学功能，在移植后能发挥原有功能。
一种神经干细胞细胞运输保护

[发明专利]一种适用于神经干细胞大规模消化的消化方法-CN202211680720.8在审
发明人：张宏君;陈小威;杨印祥;周莹;张文营;穆乾;郭迎 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2022-12-27 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明公开了一种适用于神经干细胞大规模消化的消化方法，操作步骤如下：细胞球收集、加入Accutase酶、三通阀和第一注射器组装、机械吹打解离、安装注射泵、消化终止、单细胞离心、细胞重悬、细胞计数。本发明的这种Accutase酶与机械消化装置结合的消化方式解决了神经干细胞大规模培养消化的技术稳定性及均一性的技术问题，可在较短时间内获取大量高质量的神经干细胞，可用于实验研究、生产应用或其他作用。本发明操作简便，人力需求少，扩增效率高，神经干细胞生长状态好，对神经干细胞的大规模培养及应用具有重要意义。
一种适用于神经干细胞大规模消化方法

[实用新型]一种用于连接呼吸机的大鼠气管插管-CN202223486022.2有效
发明人：孙晓东;刘鹏;王楠;王培培;李明煜 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2022-12-27 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： A61M16/04 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种用于连接呼吸机的大鼠气管插管，包括导管软针、金属空心针和三通阀门；所述的导管软针设有软针头和软针座，软针头和软针座之间为软导管，所述的导管软针内设有腔体，所述的金属空心针设置在导管软针的腔体内，所述的金属空心针设有金属头和插拔座，金属头和插拔座之间为金属导管，所述的三通阀门包括第一接头、第二接头、第三接头和控制阀门。本技术使用时，将三个部件套在一起，确保金属空心针套进软管后，略短于软管，这样，在插入插管时前段有软管包裹，不会过大的损害大鼠呼吸道，连接呼吸机前，拔出金属空心针，由于留在大鼠气管内的部分为软管，所以在长时间的手术操作中既能保证大鼠的氧气供应，又能保护大鼠呼吸道不被硬物损伤。
一种用于连接呼吸大鼠气管插管

[发明专利]一种细胞冻存液-CN202211716878.6在审
发明人：张宏君;陈小威;杨印祥;周莹;张文营;穆乾;郭迎 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2022-12-30 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种细胞冻存液，包括冻存液本体；所述的冻存液本体包括7.5份DMSO、5份重组人血白蛋白和92.5份葡萄糖。配置方法步骤如下；步骤1：配制7.5g/L葡萄糖、步骤2：加入重组人血白蛋白、步骤3：过滤除菌、步骤4：加入DMS0：过滤后液体中缓慢加入7.5mLDMS0，并用移液器吹打混匀、步骤5：质量检验、步骤6：使用保存。本发明解决了冻存液中血清对于神经干细胞制品申报的影响问题，且降低了DMSO含量，降低了高浓度DMSO对细胞影响的问题。
一种细胞冻存液

[发明专利]神经干细胞标志物的流式检测方法-CN202211682521.0在审
发明人：杨敏;陈小威;刘使君;刘昌明;朱紫薇;宁文洁;张换红;郭红玉 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2022-12-27 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种神经干细胞标志物的流式检测方法，包括以下步骤：(1)样本洗涤；(2)受体阻断：加入Fc受体阻断剂，孵育；(3)细胞固定：向细胞悬液中加入Fixation Buffer固定剂，孵育；(4)细胞破膜：加入破膜液Perm BufferⅢ，孵育；(5)细胞染色：加入相应的抗体，孵育；所述抗体为Nestin抗体、Sox1抗体和Sox2抗体；(6)数据分析：进行流式检测，对Nestin+、Sox1+Sox2的表达进行分析。本发明的神经干细胞标志物的流式检测方法，受体阻断、固定、破膜条件等过程经过优化，重复性高，稳定性好，解决了在工艺研发过程中流式检测不稳定的问题。
神经干细胞标志检测方法

[发明专利]用于检测体内移植人源细胞的特异性引物、试剂盒及方法-CN202011055501.1有效
发明人：张俊利;杨印祥;董白翔 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司
申请日： 2020-09-30 - 公布日： 2022-12-02 - 主分类号： C12Q1/6888 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于检测体内移植人源细胞的特异性引物，由针对人源性β2M基因的特异性引物和针对人管家基因GAPDH的特异性引物组成，其中，所述针对人源性β2M基因的特异性引物包括F‑β2M和R‑β2M，所述针对人管家基因GAPDH的特异性引物包括F‑GAPDH和R‑GAPDH，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示。还公开了一种试剂盒，包括上述特异性引物。还公开了一种体内移植人源细胞的检测方法：(1)细胞/组织RNA提取；(2)cDNA反转录；(3)β2M基因表达标准曲线的制备；(4)荧光定量PCR反应；(5)检测结果分析：将ΔCT值代入标准曲线，计算得出LOG(人细胞数)，换算成人细胞数。本发明包含两套引物系统，可特异性检测β2M和GAPDH基因的mRNA表达水平，无非特异性扩增，不受外界刺激影响。
用于检测体内移植细胞特异性引物试剂盒方法

[发明专利]一种神经球免疫荧光染色的方法-CN201910808706.3有效
发明人：和会娟;杨敏;闫红;张俊利;曹晓红;曹启龙 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2019-08-29 - 公布日： 2022-06-10 - 主分类号： G01N1/30 文献下载
摘要：本发明公开了一种神经球免疫荧光染色的方法：(1)神经球清洗：取悬浮培养的神经球，离心，弃上清，重悬神经球，再次离心，弃上清；(2)固定；(3)通透及封闭；(4)一抗孵育；(5)漂洗；(6)二抗孵育；(7)漂洗；(8)封片：加入PBS缓冲液，重悬，滴加于载玻片上，滴加抗荧光淬灭剂，加盖盖玻片，将神经球压平封片，用于荧光显微镜观察。本发明利用神经球直径大、肉眼可见的特性，直接采用低速离心将细胞收集管底，避免神经球在染色过程中丢失，能够保持神经球原有细胞形态及内部结构，有效避免细胞爬片过程中造成的的抗原特性改变；采用物理挤压法直接对神经球进行压片，将神经球挤压成薄膜状，无需进行切片，对设备要求低。
一种神经免疫荧光染色方法

[发明专利]一种用于人神经干细胞的细胞冻存液-CN202111610717.4在审
发明人：杨印祥;陈小威;周莹;赵成 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2021-12-27 - 公布日： 2022-05-06 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于人神经干细胞的细胞冻存液，由冻存液A和冻存液B组成，其中，冻存液A是由以下组分组成的：10％～30％白蛋白，4.0～8.0g/L葡萄糖，0.4～0.8mg/L维生素B12，0.365mg/L谷氨酰胺，6.0～9.0g/L氯化钠等；冻存液B是由以下组分组成的：10％～20％二甲基亚砜，4.0～8.0g/L葡萄糖，0.4～0.8mg/L维生素B12等。本发明还提供了利用该冻存液冻存人神经干细胞的方法。本发明的细胞冻存液及冻存方法，不含血清，无动物源病原微生物污染风险，冻存效果优，复苏后细胞活率高，对细胞增殖及细胞功能特性无影响。本发明对人神经干细胞的冻存及研究具有重要意义。
一种用于神经干细胞细胞冻存液

[发明专利]一种人神经干细胞的培养方法-CN202111610637.9在审
发明人：杨印祥;陈小威;周莹;赵成 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2021-12-27 - 公布日： 2022-04-19 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明公开了一种人神经干细胞的培养方法，包括以下步骤：(1)选取人工流产胚胎组织，剥离脑组织，浸入冻存保护液中迅速冷冻，使脑组织定型；(2)精准分离前脑部位，剥离脑膜，得到纯净的前脑组织；(3)通过机械法分离得到纯净的神经干细胞组织；(4)获得单细胞悬液：分离得到的神经干细胞组织，接种至完全神经干培养基中，培养细胞，获得单细胞悬液；(5)传代培养：培养的第4天换液一次，第8天换液一次，第10～12天传代培养。本发明的方法从流产的胚胎中取材，不存在伦理问题，本发明的方法能够实现精准分离胚胎前脑，实现准确取材，本发明对人神经干细胞系的建立、研究和应用具有重要意义。
一种神经干细胞培养方法

[发明专利]CD34+脐血单个核细胞诱导分化的培养基及培养方法-CN202011336616.8在审
发明人：张锦旭;陈小威;安文强;赵成 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2020-11-25 - 公布日： 2021-03-05 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明公开了一种CD34+脐血单个核细胞诱导分化的培养基，由基础培养基和复合添加剂组成；复合添加剂由以下组分组成：SCF：40～120ng/ml；IL3：4～8ng/ml；Epo：3～5IU；氢化可的松或地塞米松：1～2μM；Flt3‑L：30～35ng/ml；IGF‑1：30～40ng/ml。本发明还公开了一种CD34+的脐血单个核细胞诱导分化培养方法：(1)取CD34+脐血单个核细胞，接种于1阶段培养基中培养；(2)从第7天开始，添加2阶段培养基进行培养；(3)从第11天开始，添加3阶段培养基进行培养；培养至第18天，即得。本发明可显著提升CD34+脐血单个核细胞诱导分化效率，缩短CD34+脐血单个核细胞分化与扩增时间，快速、高效地获得红系特异性细胞。
cd34 单个细胞诱导分化培养基培养方法

[发明专利]脂肪组织的冻存与复苏方法及脂肪组织冻存复苏试剂盒-CN202011055473.3在审
发明人：赵成;安文强;董白翔;张锦旭 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司
申请日： 2020-09-30 - 公布日： 2021-01-01 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种脂肪组织的冻存方法：(1)脂肪组织的预处理；(2)加入脂肪组织冻存一阶段试剂，离心洗涤；加入脂肪组织冻存二阶段试剂，进行程序降温。本发明还公开了一种冻存的脂肪组织的复苏方法：从液氮中取出冻存的脂肪组织，融化，加入脂肪组织复苏液，离心洗涤，完成复苏。本发明还公开了一种脂肪组织的冻存复苏试剂盒，包括上述的脂肪组织冻存一阶段试剂，脂肪组织冻存二阶段试剂，脂肪组织复苏液。利用本发明的冻存方法冻存的脂肪组织可保持长时间细胞活性，复苏后提取的脂肪干细胞能表达多种干细胞标志物，可向脂肪、骨、软骨细胞进行分化，具有非常好的稳定性，极大的提升了脂肪组织的利用率。
脂肪组织复苏方法试剂盒

[发明专利]一种神经干细胞免疫调节功能的检测方法-CN202011060051.5在审
发明人：和会娟;杨印祥;杨敏;董白翔 -专利权人： 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司
申请日： 2020-09-30 - 公布日： 2020-12-29 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种神经干细胞免疫调节功能的检测方法：(1)悬浮神经球贴壁培养；(2)神经干细胞灭活；(3)CFSE标记hPBMC；(4)共培养；(5)淋巴细胞亚群及增殖检测；(6)细胞因子检测；(7)数据处理；(8)结果分析。本发明利用hPBMC，体外模拟人体免疫反应，研究不同来源、不同代次、不同培养方式等神经干细胞的免疫调节作用，从而对神经干细胞的工艺开发提供依据。本发明将悬浮培养的神经球消化成单细胞，然后贴壁，有利于对其进行数量控制和灭活，利用CFSE随细胞分裂在子代中平均分配的特性，结合不同淋巴细胞亚群抗体，可用流式细胞仪直观地检测特定细胞亚群地增殖情况。将各检测指标进行组合，减少操作步骤，节约实验材料，降低成本。
一种神经干细胞免疫调节功能检测方法

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