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[发明专利]vMIP-Ⅱ诱导CD8+ T细胞去磷酸化为Tcm及其在药物中的应用-CN201811616307.9有效
发明人：孙晗笑;利时雨;费正彬 -专利权人：广州溯原生物科技股份有限公司
申请日： 2018-12-27 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了病毒巨噬细胞炎性蛋白vMIP‑Ⅱ诱导CD8+T细胞去磷酸化为Tcm的应用。发明中诱导CD8+T去磷酸化为Tcm的vMIP‑Ⅱ是本实验室研制并通过国家药品和生物制品检定。本发明通过恒河猴SIV感染模型研究CD8+T细胞，发现vMIP‑Ⅱ可使Tcm依赖vMIP‑Ⅱ剂量增殖，且该增殖细胞的差异基因主要富集于趋化因子受体和磷酸化通路，进一步发现该增殖是vMIP‑Ⅱ封闭CD8+T趋化因子受体而低表达G蛋白，降低胞内Ca2+浓度和线粒体膜电位、抑制磷酸化的相关基因，使磷酸化蛋白ERK1/2和Akt低表达，从而使CD8+T磷酸化信号减弱，发生代谢重编程而转化为Tcm。因此，vMIP‑Ⅱ作用机制的这一发现为HIV/SIV感染艾滋病的药物研发提供全新策略，为抗病毒与抗肿瘤的过继性免疫治疗提供新的手段，具有重要的临床应用价值。
vmip 诱导 cd8 细胞磷酸化为 tcm 及其药物中的应用

[发明专利]新型基因治疗载体pIRES-Rsirt2/4-Tet-nap的制备方法及应用-CN201910081660.X有效
发明人：孙晗笑;利时雨 -专利权人：广州溯原生物科技股份有限公司
申请日： 2019-01-28 - 公布日： 2023-10-17 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种pIRES‑Rsirt2/4‑Tet‑nap重组质粒，其沿载体转录方向依次连接有R‑Sirt2基因、IRES序列、R‑Sirt4基因、HSV TK polyA序列、tTA序列、TRE序列和nap序列，或者反向连接。其中，R‑Sirt2和R‑Sirt4基因的功能是重构线粒体网络并逆转衰老细胞表型；IRES序列则是连接sirtuin2基因和sirtuin4基因，使两者反向共表达；tTA和TRE是四环素诱导表达元件，调控DNA结合和分子伴侣介导自噬的肽段nap序列表达。本发明所述的自噬重组载体，采用IRES序列连接sirtuin2和sirtuin4基因，能在同一载体中共表达Sirtuin2和Sirtuin4蛋白，表达后由四环素元件调控质粒DNA细胞内自噬。故该重组质粒可用于基因治疗线粒体功能障碍相关疾病的药物中的应用。
新型基因治疗载体 pires rsirt2 tet nap 制备方法应用

[发明专利]一种基质金属蛋白酶1敏感型外泌体缓释微球及其用途-CN202211225669.1在审
发明人：黄文华;吴耀彬;郑蔚晗;利时雨 -专利权人：南方医科大学第三附属医院（广东省骨科研究院）
申请日： 2022-10-09 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： A61K9/16 文献下载
摘要：一种基质金属蛋白酶1敏感型外泌体缓释微球及其应用，其中该基质金属蛋白酶1敏感型外泌体缓释微原料含有基质金属蛋白酶1敏感型自组装多肽、甲基丙烯酸酐化明胶和外泌体。本发明的基质金属蛋白酶1敏感型外泌体缓释微球具有良好的生物相容性，因此安全稳定。同时该微球能够有效减缓外泌体的释放，延长其半衰期的释放，能在基质金属蛋白酶1表达时释放外泌体。本发明能够促进骨髓间充质干细胞的迁移和骨分化，在血管生成过程中促进骨修复。
一种基质金属蛋白酶敏感型外泌体缓释微球及其用途

[发明专利]一种高效促进细胞外泌体分泌技术应用于骨修复材料制备-CN202111207008.1在审
发明人：孙晗笑;利时雨;耿承旭 -专利权人：艾威亚（广州）医药科技有限公司
申请日： 2021-10-15 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明通过脂质体介导Rab27a‑pcDNA3.1‑3xFlag‑C重组质粒转染hFOB1.19细胞，构建了hFOB1.19‑Rab27a细胞，转染后细胞稳定表达Rab27a基因与蛋白，能够分泌促成骨分化作用的外泌体。差速离心法提取的样品Western Blot、TEM、NTA结果符合外泌体特征。BCA、NTA检测证明，hFOB1.19‑Rab27a细胞单位时间内分泌外泌体的产量和效率显著提高。本发明为一种高效促进细胞分泌促成骨分化作用的外泌体的技术策略。
一种高效促进细胞外泌体分泌技术应用于修复材料制备

[发明专利]一种改善线粒体功能的粘红酵母去乙酰化酶蛋白2的应用-CN201811034076.0有效
发明人：孙晗笑;刘梦鸽;利时雨 -专利权人：广州弘润生物科技有限公司
申请日： 2018-09-05 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种改善线粒体功能的sirtuin2蛋白的应用及阐述其作用机制，属于生物技术领域。本发明将具有重构线粒体网络和改善哺乳动物衰老细胞表型功能的粘红酵母sirtuin2基因在哺乳动物细胞中重组表达。实验结果表明其可以提高融合蛋白Mfn1，Mfn2和分裂蛋白Drp1的表达水平，降低哺乳动物细胞的SA‑β‑gal活性水平，增强CK19、β1整合素的表达水平，降低细胞内ROS水平水平，明显提升细胞内ATP水平，改善线粒体形态，从而改善了线粒体网络和提高了细胞抵抗衰老的能力，为使用sirtuin2蛋白治疗线粒体功能障碍和预防衰老提供了新的策略。
一种改善线粒体功能酵母乙酰化蛋白应用

[发明专利]一种新型3D生物活性骨修复材料的制备-CN202110864884.5在审
发明人： 利时雨;孙晗笑;耿承旭;邓健善;钟志颖 -专利权人：艾威亚（广州）医药科技有限公司
申请日： 2021-07-29 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： A61L27/18 文献下载
摘要：本发明创新地将3D打印与相分离结合，构建了微米级的纤维状粗糙表面和纳米级微孔的PLA多孔支架。通过对PLA多孔支架表面包被聚多巴胺并滴加微球溶液，使微球粘附于支架表面，形成新型3D生物活性骨修复材料，用在大鼠颅骨中，可见明显的骨缺损修复。本发明利用相分离原理，采用有机溶剂四氢呋喃(THF)溶解3D打印的PLA，使PLA材料表面形成纤维样微观形貌。纳米或微米级的纤维形貌有利于干细胞及成骨细胞粘附生长，这对骨缺损修复起着重要的作用。
一种新型生物活性修复材料制备

[发明专利]一种搭载促成骨分化的外泌体微球在骨修复的应用-CN202110866829.X在审
发明人： 利时雨;孙晗笑;耿承旭;邓健善;钟志颖 -专利权人：艾威亚（广州）医药科技有限公司
申请日： 2021-07-29 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明采用GelMA、PEGDA混合Exo作为材料，通过微流控芯片技术制作PEGDA/GelMA/Exo(简称PGExo)微球。本发明公开了MC3T3细胞过表达Rab27a基因，有效提高了细胞分泌具有成骨分化作用的外泌体水平。通过共聚焦和BCA蛋白浓度测定法测定微球释放外泌体浓度，确定微球搭载的最佳外泌体浓度以及有效缓释时间。通过ALP和茜素红染色证实微球促进BMSCs细胞成骨分化。本发明为具有促成骨分化作用的外泌体微球在骨修复中的应用。
一种搭载促成分化外泌体微球修复应用

[发明专利]一种自组装多肽微球的微流控制备方法-CN202211225677.6在审
发明人：黄文华;吴耀彬;郑蔚晗;利时雨;李梓岳 -专利权人：南方医科大学第三附属医院（广东省骨科研究院）
申请日： 2022-10-09 - 公布日： 2023-01-03 - 主分类号： A61K9/16 文献下载
摘要：一种自组装多肽微球的微流控制备方法，其中微流控制备方法的步骤如下：步骤(1)、分别制备水相溶液和油相溶液；步骤(2)、将步骤(1)的水相溶液和油相溶液分别注入微流控芯片对应管道口，在芯片管道末端施加紫外光，得到自组装多肽微球；所述水相溶液含有自组装多肽、光交联水凝胶和光引发剂；所述油相溶液含有司班80和矿物油。该微流控制备方法能长时间及稳定地制备出自组装多肽微球，得到形状均一的微球。该自组装多肽微球具备自组装特性，能够在微流控芯片中自组装形成微球，而且能够实现治疗功能性药物长效缓释。
一种组装多肽控制方法

[发明专利]GPI诱导的胰岛素靶向型外泌体的制备及其在递送重组生物药物中的应用-CN202110697013.9在审
发明人：孙晗笑;陈宥宇;邓健善;钟志颖;耿承旭;利时雨 -专利权人：艾威亚（广州）医药科技有限公司
申请日： 2021-06-23 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明为GPI诱导的胰岛素靶向型外泌体的制备及其在递送重组生物药物中的应用。包括pMCP‑GPI‑Insulin和pFlag‑CMV‑2‑Kex2‑EK‑Rt‑sirt2质粒的构建。将携带GPI基因的pMCP‑GPI与携带胰岛素靶向分子的pGEM‑T‑Insulin重组构建成pMCP‑GPI‑Insulin，转染至MSC细胞后，胰岛素稳定表达并被外泌体携带，外泌体富集在目的细胞表面。将携带粘红酵母sirt2基因的pFlag‑CMV‑2‑Rt‑sirt2和携带分泌信号肽基因的pMD18‑T‑Kex2‑EK重组构建成pFlag‑CMV‑2‑Kex2‑EK‑Rt‑sirt2，转染至上述MSC细胞中，使其分泌包裹sirt2蛋白的胰岛素受体靶向外泌体。线粒体障碍小鼠肝脏细胞模型的实验证明，在外泌体作用后，细胞内ROS水平降低，抗氧化酶活性升高，线粒体膜电位下降，mtDNA含量提高，线粒体关键因子表达升高，线粒体结构改善。本发明为治疗线粒体功能障碍相关的疾病提供了新的策略。
gpi 诱导胰岛素靶向型外泌体制备及其递送重组生物药物中的应用

[发明专利]效应CD8+T细胞去分化为CD8+TCM的关键药物靶点筛选及在其药物中的应用-CN202110662857.X在审
发明人：孙晗笑;利时雨;邓健善;刘姝婷;钟志颖;耿承旭 -专利权人：广州弘润生物科技有限公司
申请日： 2021-06-15 - 公布日： 2022-12-16 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了在严重病毒感染患者中可以促使患者体内的效应CD8+T细胞去分化为CD8+TCM从而提高CD8+TCM比例，重建细胞免疫的关键药物靶点的筛选。本发明通过体外细胞实验筛选8种抑制剂，并通过基因敲降方法验证靶点抑制效果。实验发现趋化因子受体和G蛋白α作用点的抑制可以提高CD8+TCM比例，重建细胞免疫，可用于严重病毒感染的治疗，及相关药物中的应用。
效应 cd8 细胞化为 tcm 关键药物筛选中的应用

[发明专利]效应CD8+T细胞去分化为CD8+TCM的关键抑制剂及在重症病毒感染药物中的应用-CN202110662862.0在审
发明人：孙晗笑;利时雨;邓健善;刘姝婷;钟志颖;耿承旭 -专利权人：广州弘润生物科技有限公司
申请日： 2021-06-15 - 公布日： 2022-12-16 - 主分类号： A61K38/16 文献下载
摘要：本发明公开了在流感病毒FM1感染小鼠模型中使用趋化因子受体抑制剂可以通过促使小鼠体内的效应CD8+T细胞去分化为CD8+TCM，提高CD8+TCM比例从而降低小鼠体内的病毒载量。本发明通过构建流感病毒FM1感染小鼠模型，并使用广谱趋化因子受体抑制剂vMIP‑II治疗。动物实验发现广谱趋化因子受体抑制剂vMIP‑II可以降低小鼠的病毒载量，提高CD8+TCM比例，重建细胞免疫。vMIP‑II可通过调节CD8+T细胞的TCM亚组水平来重建特定的细胞免疫这可用于严重病毒感染的治疗，及相关治疗药物中的应用。
效应 cd8 细胞化为 tcm 关键抑制剂重症病毒感染药物中的应用

[发明专利]一种IPS基因工程细胞的3D仿生植入体的制备与应用-CN202110657444.2在审
发明人： 利时雨;孙晗笑;邓健善 -专利权人：艾威亚（广州）医药科技有限公司
申请日： 2021-06-12 - 公布日： 2022-12-13 - 主分类号： A61L31/14 文献下载
摘要：本发明为一种搭载vMIP基因工程细胞的3D仿生植入体的制备与应用。构建了一种多孔膜结构的线性产药植入体(直径3‑5mm，长度5‑10mm)，外层为纳米孔膜，内载活细胞，模拟血管中营养物质向组织扩散，实现高效长时产药释药。内载细胞选用ips干细胞，导入Rab27A基因高产外泌体，并转入vMIP表达质粒以产生重组蛋白/肽/核酸，在缺氧条件下以外泌体形式释放脂质体‑药物分子。该植入体在人体内持续分泌的脂质体‑药物分子，通过纳米孔膜扩散到组织并缓释入血，同时保护药物逃脱酶解和免疫性。该新型植入体作为一项平台技术，可搭载转染表达不同生物药物质粒的活细胞，实现对多种病症的预防与治疗，并可根据需要植入到体内不同部位，增强靶向性。
一种 ips 基因工程细胞仿生植入制备应用

[发明专利]一种含酵母基因工程细胞的3D仿生植入体的制备与应用-CN202110657447.6在审
发明人： 利时雨;孙晗笑;邓健善 -专利权人：艾威亚（广州）医药科技有限公司
申请日： 2021-06-12 - 公布日： 2022-12-13 - 主分类号： A61K9/00 文献下载
摘要：本发明为一种搭载粘红酵母基因工程细胞的3D仿生植入体的制备与应用。构建了一种多孔膜结构的线性产药植入体(直径3‑5mm，长度5‑10mm)，外层为纳米孔膜，内载活细胞，模拟血管中营养物质向组织扩散，高效长时产药释药。内载活细胞为粘红酵母，导入sec1基因以高产外泌体，并转入vMIP表达质粒以产生重组蛋白/肽/核酸，在缺氧条件下以外泌体形式释放脂质体‑药物分子。该植入体在人体内持续分泌的脂质体‑药物分子，通过纳米孔膜扩散至组织并缓释入血，同时保护药物免受酶解和免疫原性。该新型植入体作为一项平台技术，可搭载转染表达不同生物药物质粒的活细胞，实现对多种病症的预防与治疗，且可根据需要植入到不同部位，增强靶向性。
一种酵母基因工程细胞仿生植入制备应用

[发明专利]Bli-sir2用于线粒体功能障碍及线粒体脑肌病防治药物中的应用-CN202110531992.0在审
发明人：邓健善;孙含蓄;利时雨;冯丽霞;孙晗笑 -专利权人：广州弘润生物科技有限公司
申请日： 2021-05-17 - 公布日： 2022-11-22 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种pEGFP‑N1‑Bli‑sir2表达载体的设计与构建原理，在携带卡那霉素抗性遗传标记的荧光表达载体pEGFP‑N1上导入地衣芽孢杆菌sir2蛋白基因组DNA，构建了了能高效表达地衣芽孢杆菌sir2蛋白的pEGFP‑N1‑Bli‑sir2质粒。过氧化氢诱导的线粒体功能障碍HaCaT细胞模型实验证明，在细胞水平上，Bli‑sir2蛋白能恢复线粒体的损伤，使细胞ATP水平趋于正常，并降低了活性氧的产生。线粒体神经胃肠型脑肌病小鼠模型实验证明，在动物层次上，经Bli‑sir2的阳离子脂质体治疗后，疾病模型小鼠脑组织和肝组织的ATP含量升高，ROS水平下降，细胞色素c氧化酶活性升高，线粒体DNA增加，线粒体功能改善；线粒体动力学Mfn1和Mfn2和自噬蛋白PINK1、Parkin及LC3 I/LC3 II的表达水平升高。本发明为Bli‑sir2蛋白在细胞线粒体相关肌病及线粒体脑肌病的防治药物中的应用。
bli sir2 用于线粒体功能障碍脑肌病防治药物中的应用

[发明专利]一种纳米纤维表面多孔骨修复支架及其制备方法-CN202210853278.8在审
发明人：黄文华;吴耀彬;李梓岳;利时雨;郑蔚晗 -专利权人：南方医科大学
申请日： 2022-07-20 - 公布日： 2022-10-25 - 主分类号： B29C64/106 文献下载
摘要：一种纳米纤维表面多孔骨修复支架及其制备方法，其中制备方法包括步骤有：步骤(1)、将四氢呋喃、N,N‑二甲基甲酰胺和氯化钠混合，得到混合液；步骤(2)、将β‑磷酸三钙和聚乳酸加入至步骤(1)得到的混合液中，得到铸膜液；步骤(3)、预先将3D打印平台进行降温，然后再将步骤(2)得到的铸膜液作为打印墨水并根据打印参数在3D打印平台中进行3D打印，得到打印支架；步骤(4)、将步骤(3)得到的打印支架降温、洗涤，得到的纳米纤维表面多孔骨修复支架。该支架利用低温热致相分离技术形成微纳米级别的纤维多孔结构，而且本发明的纳米纤维表面多孔骨修复支架的生物相容性良好，同时能具有促成骨分化效果好，利于骨组织的发生和长入。
一种纳米纤维表面多孔修复支架及其制备方法

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