本发明公开了一种快速鉴定核桃黑斑蚜的试剂盒及方法,属于昆虫分子鉴定领域。所述试剂盒包括具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID No.2所示核苷酸序列的下游引物。所述方法包括:(1)获得待测蚜虫的基因组DNA;(2)利用上述上游引物和下游引物进行PCR扩增;(3)利用凝胶电泳分析PCR扩增产物。本发明的试剂盒特异性好,灵敏度高;采用特异引物进行PCR扩增来鉴定核桃黑斑蚜,操作简单、快速、高效,结果准确。利用本发明,核桃黑斑蚜的DNA最低检出浓度为0.188ng/μL。