本发明涉及毛霉菌检测技术领域,公开了一种用于检测致病毛霉菌的多重PCR引物探针组和试剂盒。该引物探针组包括引物组和探针组,所述引物组包括:用于检测米根霉的上游引物和下游引物,序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示;用于检测微小根毛霉的上游引物和下游引物,序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示;用于检测伞枝横梗霉的上游引物和下游引物,序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。本发明的引物探针组和试剂盒能实现米根霉、微小根毛霉和伞枝横梗霉在种水平的同步检测,检测速度快,且检测特异性和准确度高。