本发明提供了一种基于RPA检测mcr‑1基因的组合物、试剂盒和应用,涉及生物学检测的技术领域。该组合物包含上游引物、下游引物和探针,上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,且探针为3’端阻断的寡聚核苷酸,非末端位置还含有核酸内切酶nfo识别位点;探针的5’端标记第一标记物,下游引物的5’端标记第二标记物,第一标记物和第二标记物与不同的分子特异性结合。该基于RPA检测mcr‑1基因的组合物和试剂盒简化了mcr‑1基因的检测方法,且具有良好的灵敏度和特异性。