本发明公开了一种用于阿扎那韦中间体生产的醇脱氢酶，属于医药生物技术领域，该醇脱氢酶与SEQ ID NO.8的野生型醇脱氢酶相比表现出更强的催化活性，醇脱氢酶可以通过使编码该酶的体外重组、多核苷酸诱变、DNA改组、易错PCR和定向进化方法等获得，上述醇脱氢酶，具有选自以下特征中的一个或多个突变：T37A、D38E、P41K、D44N、V45K。本发明反应条件温和，对设备要求低，生产过程无需高温或者冷却，能耗低，由于酶催化具有高效，专一的选择性，故以此法生产阿扎那韦的关键中间体无副产物产生，纯化方便；此外反应溶剂主要为水，三废排放低，绿色环保。
本发明公开了一种用于生产(R)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯的酮还原酶突变体，属于生物技术领域，其源于Meyerozyma guilliermondii的野生型酮还原酶，能将4‑氯乙酰乙酸乙酯转化生成(R)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯，与野生型序列相比具有更高的醇脱氢酶活性，该酮还原酶突变体的序列为SEQ ID NO.2，该酮还原酶突变体的酶活性比野生型酮还原酶的活性至少增强2‑10倍。本发明酮还原酶突变体和编码这种突变体的多核苷酸可以使用本领域技术人员通常使用的方法制备。突变体可以通过使编码该酶的体外重组、多核苷酸诱变、DNA改组、易错PCR和定向进化方法等获得。
本发明公开了一种酶活提高的酮还原酶突变体及其应用，属于生物技术领域，其源于Meyerozyma guilliermondii的野生型酮还原酶，能将4‑氯乙酰乙酸乙酯转化生成(R)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯，酮还原酶突变体与野生型序列相比具有更高的醇脱氢酶活性，与SEQ ID NO.8具有90％以上相似性。本发明的酮还原酶突变体具有明显的高比酶活，比野生型酮还原酶提高了2‑10倍，反应条件温和，对设备要求低，生产过程无需高温或者冷却，能耗低，由于酶催化具有高效，专一的选择性，纯化方便，此外反应绝大部分溶剂为水，无需加入乙酸丁酯等溶剂形成双相反应体系，三废排放低，制备过程绿色环保。
本发明公开了一种抗艾滋病药物阿扎那韦中间体的制备方法，属于医药生物技术领域，通过全基因合成的方法，对基因的二级结构以及密码子偏好性进行调整，设计引物长度，合成引物，并将获得的引物加双蒸水溶解后，加到如下的反应体系中，将配制好的PCR反应体系进行扩增，将PCR得到的DNA片段进行切胶纯化，挑取单克隆进行测序，测序成功的DNA序列为SEQ ID NO.1，命名为Sst‑1，其对应的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。本发明反应条件温和，对设备要求低，生产过程无需高温或者冷却，能耗低，纯化方便，整个体系使用单酶催化，底物用量/NAD用量高达1540:1，辅酶循环次数高，且反应条件温和。
