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[发明专利]一种用于递送mRNA的生物制剂及其制备方法-CN202310762367.6在审
发明人： 肖忠党;司珂;沈杨;孙博 -专利权人：江苏运动健康研究院
申请日： 2023-06-27 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于递送mRNA的生物制剂及其制备方法，所述的生物制剂为工程细胞所分泌、内部装载特定mRNA的微囊泡，主要涉及基因工程技术领域。本发明主要将装配蛋白连接到微囊泡膜蛋白的C端，将与装配蛋白结合的引导结合序列(一段特殊的RNA茎环结构)插入编码目的mRNA的3’‑非翻译区(3’‑UTR)，来设计两种融合基因结构，并以此构建重组慢病毒载体和稳转细胞系，从而生产微囊泡。本发明所构微囊泡，生物相容性好，制备方法简单，可在重组细胞微囊泡生成时，通过装配蛋白和引导结合序列间的相互作用将特定mRNA装载到微囊泡内部。本发明所构微囊泡可将特定mRNA递送到细胞内，可以直接应用于体内。
一种用于递送 mrna 生物制剂及其制备方法

[发明专利]一种增强肿瘤抗原作用的B7H3-CAR嵌合抗原受体及其应用-CN202310656078.8在审
发明人： 肖忠党;沈杨;孙博;戴竹 -专利权人：东南大学
申请日： 2022-09-26 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种增强肿瘤抗原作用的B7H3‑CAR嵌合抗原受体及其应用，所述CAR包括信号肽、靶点的scFv、铰链结构域、跨膜结构域、胞内共刺激结构域，所述嵌合抗原受体还包括JAK酶激活信号转导结构域。本发明提供的嵌合抗原受体能增强肿瘤抗原活化的杀伤性T细胞对表达靶点抗原的肿瘤细胞持久的杀伤能力，对表达靶点抗原的非肿瘤细胞也没有杀伤作用。本发明可用于实体瘤的抗肿瘤治疗。
一种增强肿瘤抗原作用 b7h3 car 嵌合受体及其应用

[发明专利]一种胰岛素分泌型基因工程细胞药物的制备方法-CN202210904668.3在审
发明人：孙博;肖忠党;李裕民 -专利权人：东南大学
申请日： 2022-07-29 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了一种胰岛素分泌型细胞药物的制备方法，通过本发明设计的AP2‑hINS‑P2A序列意外的发现，干细胞分化为脂肪细胞后，能够行使糖刺激引起的胰岛素分泌功能。脂肪细胞本身具有较强的胰岛素敏感性，葡萄糖摄取率高，胰岛素的高表达带来的潜在危害处于可控范围，从而避免了基因疗法体内转染后各种细胞无差别的表达胰岛素的风险，对病人的健康造成威胁。同时，本发明启动子的激活充分利用了细胞本身的反式元件，使得效应细胞的效率更高、组织特异性更好。
一种胰岛素分泌基因工程细胞药物制备方法

[发明专利]一种增强肿瘤抗原作用的CAR及其应用-CN202211177999.8在审
发明人： 肖忠党;沈杨;孙博;戴竹 -专利权人：东南大学
申请日： 2022-09-26 - 公布日： 2023-04-21 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种增强肿瘤抗原作用的CAR及其应用，所述CAR包括信号肽、靶点的scFv、铰链结构域、跨膜结构域、胞内共刺激结构域，所述嵌合抗原受体还包括JAK酶激活信号转导结构域。本发明提供的嵌合抗原受体能增强肿瘤抗原活化的杀伤性T细胞对表达靶点抗原的肿瘤细胞持久的杀伤能力，对表达靶点抗原的非肿瘤细胞也没有杀伤作用。本发明可用于实体瘤的抗肿瘤治疗。
一种增强肿瘤抗原作用 car 及其应用

[发明专利]一种长效的嵌合抗原受体、载体及其构建方法和应用-CN202211177828.5在审
发明人： 肖忠党;沈杨;孙博 -专利权人：东南大学
申请日： 2022-09-26 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种长效的嵌合抗原受体、载体及其构建方法和应用，所述长效的嵌合抗原受体包括信号肽、靶点的scFv、铰链结构域、跨膜结构域、胞内共刺激结构域、JAK酶激活转导域和胞内信号转导域，由本发明制备的CAR‑NK和CAR‑T细胞对表达靶点的肿瘤细胞有很强的持久杀伤作用。本发明提供的CAR‑NK和CAR‑T细胞可用于实体瘤的抗肿瘤治疗。
一种长效嵌合抗原受体载体及其构建方法应用

[发明专利]长效的双靶点嵌合抗原受体、核酸分子、重组载体、细胞及其应用-CN202211179782.0在审
发明人： 肖忠党;沈杨;孙博;严凯;李占萍 -专利权人：东南大学
申请日： 2022-09-26 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供了长效的双靶点嵌合抗原受体、核酸分子、重组载体、细胞及其应用，所述双靶嵌合抗原受体包含两条独立跨膜蛋白组成的CAR链，第一条CAR链靶向第一靶点的scFv，胞内信号包含第二信号和胞内转导信号或只有胞内转导信号，第二条CAR链靶向第二靶点的scFv，胞内信号包含共刺激信号和JAK酶激活转导域。由本发明制备的CAR‑T细胞对同时表达第一靶点和第二靶点的肿瘤细胞有很强的持久杀伤作用，可用于实体瘤的抗肿瘤治疗。
长效双靶点嵌合抗原受体核酸分子重组载体细胞及其应用

[发明专利]基于微流控芯片的CAR-T细胞自动化制备系统-CN201810552160.5有效
发明人： 肖忠党;郭士成;孙博;叶正 -专利权人：东南大学
申请日： 2018-05-31 - 公布日： 2022-03-04 - 主分类号： C12M3/02 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养领域，特别涉及基于微流控芯片的CAR‑T细胞自动化制备系统，包括微流控芯片，培养袋，产品袋，各个构件之间通过管路连接。通过采用这种闭环式的自动化方案进行细胞治疗产品地生产制备一来可以减少对技术人员的需求，避免产品制备过程中因为人工参与带来的不确定性风险，二来能够显著降低相应的人力成本和GMP洁净室成本，进而降低整个细胞治疗的成本。
基于微流控芯片 car 细胞自动化制备系统

[发明专利]一种间充质干细胞药物的基因编辑方法及应用-CN202111103743.8在审
发明人：孙博;肖忠党;李裕民 -专利权人：东南大学
申请日： 2021-09-18 - 公布日： 2022-02-01 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种间充质干细胞药物的基因编辑方法及应用，本发明应用该方法制备出葡萄糖水平敏感的能够治疗糖尿病高血糖症的基因工程干细胞药物，操作简便，安全性高。本发明发现使用Cas9+血管内皮细胞分泌囊泡能将目的基因转染进入MSC内，高效地通过Crispr‑Cas9基因编辑系统实现精确编辑，增强其功能的同时保留MSC免疫调节和促生长特性的方法。
一种间充质干细胞药物基因编辑方法应用

[发明专利]IRES-hINS重组基因、慢病毒及其构建方法和应用-CN202111046900.6在审
发明人：孙博;肖忠党;贾法尔.阿里;何聪;李裕民 -专利权人：东南大学
申请日： 2021-09-07 - 公布日： 2021-12-14 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了含有弗林蛋白酶酶切位点的重组胰岛素基因，所述含有弗林蛋白酶酶切位点的重组胰岛素基因的寡核苷酸序列的正义链如SEQ ID NO:1所示，其反义链序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还公开了IRES‑hINS重组基因、表达盒、重组载体、重组细胞和慢病毒及其重组载体的构建方法和应用。本发明还公开了重组基因等对重组胰岛素相关治疗药物中的应用。本发明设计的IRES‑hINS序列在转染细胞后能够对培养基中的血糖浓度变化做出响应，从而升高或降低胰岛素的合成水平，对糖尿病的治疗治疗具有十分重要的意义。
ires hins 重组基因病毒及其构建方法应用

[发明专利]一种用于全血T淋巴细胞的免疫磁珠的制备方法及其应用-CN201811187957.6在审
发明人： 肖忠党;叶正;孙博;邓媛媛;廖家洁;刘心怡;魏嘉莉;郭士成 -专利权人：东南大学
申请日： 2018-10-12 - 公布日： 2019-01-18 - 主分类号： G01N33/50 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于全血T淋巴细胞的免疫磁珠的制备方法及其应用；包括以下步骤：1）捕获T淋巴细胞的抗体、辅助T淋巴细胞扩增的抗体和偶联剂进行偶联反应；2）将免疫磁珠加入偶联抗体中孵育，得到含有偶联抗体的免疫磁珠，洗涤备用；3）从全血中提取样本细胞，洗涤备用；4）加入含有偶联抗体的免疫磁珠进行孵育；5）洗涤孵育完成的免疫磁珠，弃上清，得到纯化的全血T淋巴细胞；6）将得到纯化的全血T淋巴细胞转移到培养液中，完成全血T淋巴细胞的特异性扩增；本发明采用免疫磁珠法细胞分选扩增技术，利用抗体偶联磁珠实现对全血T细胞的特异性捕获和分选，简单操作便能快速实现全血T淋巴细胞的分离扩增，易于实现自动化。
全血免疫磁珠偶联抗体孵育抗体扩增洗涤制备捕获备用培养液辅助T淋巴细胞免疫磁珠法特异性扩增偶联反应细胞分选样本细胞偶联剂磁珠分选偶联应用自动化

[发明专利]一种高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的方法-CN201510553190.4有效
发明人：孙博;肖忠党 -专利权人：东南大学
申请日： 2015-09-01 - 公布日： 2018-12-07 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的方法。该方法包括：首先在诱使细胞团聚的前提下，应用MET激动剂处理该细胞团，达到高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的方法。该方法有助于提高干细胞向胰岛素分泌性细胞分化的效率和活力，进而治疗因β细胞受损，胰岛素分泌绝对量减少而导致的高血糖症。
一种高效诱导干细胞胰岛细胞分化方法

[发明专利]一种选择性大量纯化扩增干细胞的方法-CN201510514468.7有效
发明人： 肖忠党;孙博;王秀;王俊华;胡飞虎 -专利权人：东南大学
申请日： 2015-08-20 - 公布日： 2018-05-04 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种选择性大量纯化扩增干细胞的方法。该方法包括使用脱脂棉纤维或经修饰的脱脂棉纤维选择性扩增干细胞。使用基于脱脂棉纤维的高分子材料能有效增值纯化干细胞并维持干细胞特性不变，有利于实现干细胞的大量扩增。
一种选择性大量纯化扩增干细胞方法

[发明专利]一种制备自噬小体型瘤苗的培养基添加剂及其制备方法-CN201710018536.X在审
发明人：何向锋;肖忠党;沈康;胡飞虎;朱延亮;金华;曹新江;王俊华;司珂;叶正 -专利权人：东南大学;南通市肿瘤医院
申请日： 2017-01-10 - 公布日： 2017-05-10 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备自噬小体型瘤苗的培养基添加剂，冻干粉制剂包含一组组合物；组合物包含蛋白酶体抑制剂、自噬诱导剂、溶酶体腔碱化剂、赋形剂和抗氧化剂；本发明具有如下突出的优点本发明所述的添加剂组合物中含有蛋白酶体抑制剂、溶酶体腔碱化剂、自噬诱导剂，三者协同，一方面，可同时抑制肿瘤细胞的蛋白酶体降解途径和自噬溶酶体降解途径，使肿瘤抗原得以保存；另一方面，诱导自噬小体形成，使大量肿瘤抗原保存在自噬小体中，通过提取这些自噬小体，即可制备自噬小体型亚细胞肿瘤疫苗。
一种制备体型培养基添加剂及其方法

[发明专利]大鼠大网膜脂肪来源间充质干细胞的提取方法和专用培养基-CN201210512416.2无效
发明人：胡飞虎;孙博;肖忠党 -专利权人：东南大学
申请日： 2012-12-04 - 公布日： 2013-07-03 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种分离提取大鼠大网膜脂肪间充质干细胞的方法和专用培养基。无菌条件下取健康斯泼累格·多雷（Sprague Dawley，SD）大鼠的大网膜脂肪，剪碎后用冰磷酸盐缓冲液混合后离心，去除部分脂肪组织。用I型和II混合胶原酶消化离心，去除上部脂肪细胞组织。再次离心后用加入含有特定化学物质和生长因子的专用培养基重悬后移入培养瓶中放入培养箱中持续传代培养。本发明在大鼠体内提出一种大网膜脂肪来源的间充质干细胞，同时在培养过程中通过添加特定的化学物质和生长因子的专用培养既可以解决干细胞在体外培养中容易衰老以及分化问题，获得了一种能长期保持干细胞特性的大网膜脂肪来源的间充质干细胞。
大鼠网膜脂肪来源间充质干细胞提取方法专用培养基

[发明专利]人脐带间充质干细胞的提取和培养方法-CN201210510379.1无效
发明人： 肖忠党;孟宪会;孙博;胡飞虎;梁高峰 -专利权人：东南大学
申请日： 2012-12-04 - 公布日： 2013-03-13 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种人脐带间充质干细胞的提取和培养方法。脐带组织切碎后经I型胶原酶消化后移入含培养基的培养瓶中持续培养。所用培养基为低糖DMEM基础培养基并且添加了胎牛血清、成纤维生长因子、上皮细胞生长因子、细胞转录因子、胆固醇。使用本发明的提取和培养方法可以长期培养人的脐带间充质干细胞，并且维持干细胞活性。本发明解决了目前人脐带间充质干细胞培养中细胞衰老过快以及分化问题，能够长期获得具有干细胞特性的人脐带间充质干细胞。
脐带间充质干细胞提取培养方法

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