本发明公开了一种基于绝对定量鉴定酿酒酵母中L/M核酸片段的方法,属于生物工程技术领域。本发明提供了一种鉴定酿酒酵母L dsRNA和酿酒酵母M dsRNA的SYBR Green I荧光定量方法,此方法为先将一定浓度梯度的重组质粒进行SYBR Green I荧光定量,建立质粒浓度与CT值的标准曲线,再提取样本微生物RNA逆转录为cDNA进行SYBR Green I荧光定量,以标准曲线公式为依据,直接计算得到酿酒酵母L dsRNA和酿酒酵母M dsRNA片段的浓度,以达到快速绝对定量的目的。本发明旨在快速、准确检测发酵微生物中酿酒酵母L dsRNA和酿酒酵母M dsRNA的含量,进而为揭示其在白酒发酵过程中的影响、作用和演替规律,同时为提高白酒的品质奠定基础,具有较高的实际应用价值。