本发明公开了基于一步法RT‑PCR技术检测或辅助检测南方番茄病毒的引物对、RT‑PCR试剂、RT‑PCR试剂盒及其应用和方法。该引物对由引物STV‑812‑F和引物STV‑812‑R组成;所述STV‑812‑F为如下(a1)或(a2);(a1)序列表的SEQ ID No.1所示的单链DNA分子;(a2)将SEQ ID No.1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID No.1具有相同功能的DNA分子;所述STV‑812‑R为如下(a3)或(a4);(a3)序列表的SEQ ID No.2所示的单链DNA分子;(a4)将SEQ ID No.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID No.2具有相同功能的DNA分子。该引物对能够特异性扩增南方番茄病毒,由此可鉴定出番茄种子或植株上是否携带该病毒病害。