本发明公开一段对口蹄疫病毒有抑制作用的干扰靶序列。本发明的对口蹄疫病毒有抑制作用的干扰靶序列是位于奶牛功能基因ENTPDase6 mRNA上的RNA干扰靶序列,其序列为序列表中的SEQ ID No.1所示的核苷酸序列、SEQ ID No.2所示的核苷酸序列和SEQ ID No.3所示的核苷酸序列所示的核苷酸序列。由上述的序列可分别确定出发夹状DNA互补序列,利用合适的基因载体将该DNA序列转染至牛细胞后可以转录成发夹状双链RNA,能够与奶牛功能基因ENTPDase6中的SEQ ID No.1片段特异性结合,从而抑制ENTPDase6的正常表达,使其表达产物量降低,进而抑制口蹄疫病毒的复制。
本发明公开了一种高效表达口蹄疫病毒抗原基因的重组乳酸杆菌及其制备方法和应用,属于生物技术领域。本发明的重组乳酸杆菌含有在N端引入改造的乳酸杆菌信号肽基因并进行密码子优化的口蹄疫病毒VP1基因序列,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明对乳酸杆菌信号肽的结构进行改造,将改造的乳酸杆菌信号肽基因借一连接短肽GSGGSGG与密码子优化后的口蹄疫病毒VP1基因进行融合,将融合后的基因序列插入大肠杆菌‑乳酸菌穿梭表达载体中,构建重组质粒pSIP/opti‑FMDV‑A/VP1,将pSIP/opti‑FMDV‑A/VP1重组质粒转化至乳酸杆菌。本发明针对重组乳酸杆菌表达系统,建立了适当改造信号肽结构以提高外源蛋白分泌效率的新思路和新方法,为进一步研发新型黏膜免疫疫苗提供理论依据和技术支持。
本发明公开一段对口蹄疫病毒有抑制作用的干扰靶序列。本发明的对口蹄疫病毒有抑制作用的干扰靶序列是位于奶牛功能基因ENTPDase6 mRNA上的RNA干扰靶序列,其序列为序列表中的SEQ ID No.1所示的核苷酸序列、SEQ ID No.2所示的核苷酸序列和SEQ ID No.3所示的核苷酸序列所示的核苷酸序列。由上述的序列可分别确定出发夹状DNA互补序列,利用合适的基因载体将该DNA序列转染至牛细胞后可以转录成发夹状双链RNA,能够与奶牛功能基因ENTPDase6中的SEQ ID No.1片段特异性结合,从而抑制ENTPDase6的正常表达,使其表达产物量降低,进而抑制口蹄疫病毒的复制。