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[发明专利]一种以葡萄糖为底物从头合成咖啡酸菌株的构建与应用-CN202310898070.2在审
发明人：张岩峰;梁美祺;陈永丽;潘朝智;顾丽红 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-07-20 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种以葡萄糖为底物从头合成咖啡酸菌株的构建与应用，属于生物化工领域。本发明提供了一种重组大肠杆菌，所述重组大肠杆菌以敲除了酪氨酸合成途径上的转录抑制子基因tyrR，并过表达了大肠杆菌来源的3‑脱氧‑D‑阿拉伯庚酮糖酸‑7‑磷酸合成酶突变体aroGfbr和预苯酸脱水酶tyrAfbr的大肠杆菌为底盘细胞，同时过表达了来源于黄杆菌属的酪氨酸氨基裂解酶，来源于塔尔波嗜热菌的4‑羟苯乙酸酯‑3‑羟化酶氧化酶成分TtHpaB，及来源于嗜热菌的4‑羟苯乙酸酯‑3‑羟化酶还原酶成分TtHpaC。本发明获得的高产咖啡酸菌株，咖啡酸的积累达到14g/L，为目前报道的最高水平。
一种葡萄糖从头合成咖啡菌株构建应用

[发明专利]应用岩藻糖基转移酶生产2’-岩藻糖基乳糖的方法-CN202310900739.7在审
发明人：张岩峰;胡松;陈永丽;潘朝智;顾丽红 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-07-20 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了应用岩藻糖基转移酶生产2’‑岩藻糖基乳糖的方法，属于微生物发酵工程领域。本发明提供了从云南热泉环境所获取的微生物基因资源库中筛选的α‑1,2的岩藻糖基转移酶及其编码基因，利用基因重组技术，将α‑1,2岩藻糖基转移酶的编码基因在大肠杆菌BW25113中异源表达，所获得的基因工程菌可用于2’‑岩藻糖基乳糖的发酵生产。本发明所筛选的α‑1,2岩藻糖基转移酶具有良好的热稳定性，在2’‑岩藻糖基乳糖的发酵生产等应用中具有很大的潜力。
应用糖基转移酶生产岩藻糖基乳糖方法

[发明专利]一种从发酵液中分离提取亚精胺的方法-CN202310898385.7在审
发明人：高统海;李志;张岩峰 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-07-20 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C07C209/86 文献下载
摘要：本发明公开了一种从发酵液中分离提取亚精胺的方法，属于生物化工领域。本发明的方法包括：S1、发酵液预处理：亚精胺发酵液依次经过无机陶瓷膜，得到澄清液；S2、超滤和浓缩：将步骤S1得到的澄清液过超滤膜，透过液经反渗透膜浓缩；S3、萃取：将步骤S2所得浓缩液用有机溶剂萃取，得到萃取相，S4、蒸有机溶剂；S5、两步分子蒸馏：将步骤S4蒸完溶剂的亚精胺物料用两步分子蒸馏进行分离，第一步分子蒸馏去除低沸点游离胺和腐胺等发酵代谢产物，再通过第二步分子蒸馏对第一步的重组分进行再次提取得到亚精胺纯品。本发明所述纯化方法工艺简便，对亚精胺的纯化效率高，所得产物的纯度＞98％，收率＞80％。
一种发酵分离提取精胺方法

[发明专利]一种用于亚精胺合成的基因及高产亚精胺菌株的构建-CN202210629535.X有效
发明人：张山;丁利平 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2022-06-01 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于亚精胺合成的基因及高产亚精胺菌株的构建，属于生物技术领域。本发明在大肠杆菌中表达了来源于里氏木霉的甲硫氨酸脱羧酶基因speD，并在大肠杆菌中过表达内源的speE、speF和metK，敲除亚精胺代谢途径中的亚精胺乙酰转移酶speG和亚精胺吸收转运体PotD，异源表达来源于鲍曼不动杆菌中负责多胺类物质外泌的蛋白AmvA，构建得到了能够高效合成亚精胺的重组大肠杆菌BWΔGΔD‑DEFK‑A。重组大肠杆菌BWΔGΔD‑DEFK‑A在摇瓶和发酵罐体系中亚精胺的产量分别可达347mg/L和2.11g/L，单位菌体的亚精胺合成量分别为115.7mg/gDCW和132.7mg/gDCW。亚精胺合成量在现有的亚精胺生物合成领域占有领先优势、具备广阔的应用前景。
一种用于精胺合成基因高产菌株构建

[发明专利]一种来源于曲卓木天然热泉的麦角硫因合成基因及其开发应用-CN202111393552.X有效
发明人：张山;丁利平 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2021-11-23 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明公开了一种来源于曲卓木天然热泉的麦角硫因合成基因及其开发应用，属于基因工程领域。本发明提供了一株重组里氏木霉，所述重组里氏木霉是以里氏木霉TU‑6为宿主，插入表达盒pyr4‑Pcbh1‑tegt1‑Tcbh2后得到的，所述表达盒插入到里氏木霉TU‑6的scaffold_33:120008‑120031位点。本发明中里氏木霉tegt1过表达菌株在纤维素诱导条件下，麦角硫因的合成提高量至5.316mg/g(d.w.)，相比于原始菌株TU‑6的0.239mg/g(d.w.)，麦角硫因产量提高了22.24倍，本发明实现了在里氏木霉中通过基因工程提高麦角硫因的合成。
一种来源于曲卓木天然热泉麦角合成基因及其开发应用

[发明专利]一种用咖啡酸-O-甲基转移酶生产阿魏酸的方法及应用-CN202310929672.X在审
发明人：张岩峰;梁美祺;毛启红;陈永丽;潘朝智;顾丽红 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-07-26 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种用咖啡酸‑O‑甲基转移酶生产阿魏酸的方法及应用，属于生物工程技术领域。本发明在大肠杆菌中过表达在北极苔原带宏基因组样品中筛选得到的咖啡酸‑O‑甲基转移酶COMT25468和S‑腺苷甲硫氨酸合成酶MetK，并敲除SAM降解途径基因speD，构建大肠杆菌基因工程菌。所述大肠杆菌基因工程菌在5L发酵罐中发酵72h，阿魏酸的积累量达到12g/L，咖啡酸的摩尔转化率为74.2％。
一种咖啡甲基转移酶生产阿魏酸方法应用

[发明专利]一种生产麦角硫因基因工程菌的构建及应用-CN202310930735.3在审
发明人：张岩峰;陈永丽;张殿才;闫志全;王琳 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-07-26 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产麦角硫因基因工程菌的构建及应用，属于基因工程技术领域。本发明在E coli.BW25113的ppnn位点上整合基因purH、purA和purB，并在mazG位点上整合基因ndk和adk，并过表达cfegt1和cfegt2，cfegt1和cfegt2之间通过柔性接头连接，构建了生产麦角硫因的基因工程菌E2‑cfegt1‑linker‑cfegt2。所得基因工程菌E2‑cfegt1‑linker‑cfegt2在20ml摇瓶中发酵48h，生产麦角硫因产量为112mg/L；在2L体系的发酵罐中发酵96h，生产麦角硫因产量为8g/L，有利于麦角硫因的工业化生产。
一种生产麦角基因工程构建应用

[发明专利]一种生产天冬酰胺酶重组里氏木霉的制备方法-CN202310890706.9在审
发明人：张岩峰;陈永丽;潘朝智 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-07-19 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产天冬酰胺酶重组里氏木霉的制备方法，属于生物技术领域。本发明将包含内含子的黑曲霉天冬酰胺酶基因随机整合到里氏木霉的基因组中，基于里氏木霉异源蛋白表达系统的构建及其应用中构建的里氏木霉异源蛋白表达系统，首次在里氏木霉实现了天冬酰胺酶的分泌表达，比活为1094.64U/g。本发明发酵工艺简单，原料廉价易得，同时可将天冬酰胺酶直接分泌到胞外，简化了分离纯化工艺，为天冬酰胺酶的工业化生产奠定了基础。
一种生产天冬酰胺酶重组里氏制备方法

[发明专利]一种生产无降解类人源胶原蛋白的毕赤酵母及其应用-CN202310917829.7在审
发明人：张岩峰;毛启红;陈永丽;顾丽红;潘朝智;闫志全;王琳 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-07-24 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C07K14/78 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产无降解类人源胶原蛋白的毕赤酵母及其应用，属于生物工程领域。本发明对类人源胶原蛋白基因进行了计算机优化改造，获得了可在微生物发酵过程中不发生降解的类人源胶原蛋白，并使用了分泌信号α‑因子，使类人源胶原蛋白分泌至胞外，便于验证和分离纯化。本发明还对基因工程菌发酵生产类人源胶原蛋白的条件进行了优化，使蛋白表达量达5.2g/L，具有工业化应用前景。
一种生产降解类人源胶原蛋白酵母及其应用

[发明专利]一种利用混合碳源生产2′-岩藻糖基乳糖的方法及其应用-CN202310914970.1在审
发明人：张岩峰;曹嘉誉;陈永丽;潘朝智;顾丽红 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-07-24 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用混合碳源生产2′‑岩藻糖基乳糖的方法，以经过基因工程操作的大肠杆菌为出发菌株，以葡萄糖和甘油质量比为1：4作为混合碳源，使得2′‑岩藻糖基乳糖产量达到了78.8g/L，实现了2′‑岩藻糖基乳糖在大肠杆菌中的高效从头合成。
一种利用混合碳源生产岩藻糖基乳糖方法及其应用

[发明专利]一株高产香兰素的链霉菌诱变菌株及其应用-CN202310871858.4在审
发明人：张岩峰;陈永丽;潘朝智;李志;高统海 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-07-17 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一株高产香兰素的链霉菌诱变菌株及其应用，属于微生物发酵领域。本发明获得高产香兰素的诱变菌株Streptomyces sp.ZKXY‑5，已于2023年04月06日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏编号为CGMCC NO.27016。本发明提供的菌株Streptomyces sp.ZKXY‑5发酵92h时，香兰素的含量达到28.3g/L，提高了产量的同时可降低生产成本。并且，具有良好的遗传稳定性，传代培养10批次香兰素产量和生物量无显著差异，具有工业化应用的前景。
高产香兰素霉菌诱变菌株及其应用

[发明专利]抗逆性谷氨酰胺酶的制备方法-CN202310924415.7在审
发明人：张岩峰;陈永丽;潘朝智 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-07-25 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明公开了抗逆性谷氨酰胺酶的制备方法，属于生物技术领域。本研究利用里氏木霉作为表达宿主，成功实现了隐球菌(Cryptococcus nodaensis)来源的谷氨酰胺酶的外泌表达，且产量较高。本发明基于里氏木霉异源蛋白表达系统，进行组合，通过谷氨酰胺酶基因的密码子优化，首次在里氏木霉中实现了隐球菌来源谷氨酰胺酶基因的高效分泌表达，该酶具有良好的耐盐、耐热和酸碱稳定特性，发酵液最高酶活可达4820U/L。
抗逆性谷氨酰胺制备方法

[发明专利]一种基于液滴微流控高通量筛选高产麦角硫因工程菌的方法-CN202310756326.6在审
发明人：张岩峰;陈永丽;甘淼;顾丽红;张凯敏;邹智蓉 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-06-26 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于液滴微流控高通量筛选高产麦角硫因工程菌的方法，属于生物技术领域。本发明利用特殊的荧光底物、优化培养体系和w/o/w的液滴配方，集成液滴微流控芯片和荧光分选系统开发出一套针对麦角硫因高产菌株筛选的液滴微流控分选方法，具有速度快，通量高，成本低等显著特点。通过在微芯片上设计特定的通道，可以实现液滴的生成、混合输送、检测、分选等操控，使得对液滴中麦角硫因荧光强度的鉴别以及高荧光信号液滴的分离操作成为可能。
一种基于液滴微流控高通量筛选高产麦角工程方法

[发明专利]一种麦角硫因核糖开关的筛选方法-CN202310756344.4在审
发明人：张岩峰;顾丽红;陈永丽;甘淼;张艳艳;邹智蓉;张凯敏;黄伟林 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2023-06-26 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种麦角硫因核糖开关的筛选方法，属于基因表达调控领域。本发明筛选麦角硫因核糖开关的方法是在SELEX筛选流程中，先将变性后的RNA和EGT结合孵育再放入柱中与琼脂糖微球震荡结合；选择镍离子耐受能力较强的菌株作为表达宿主，利用一定浓度的镍离子进行体内筛选，更加有效地筛除阴性菌，降低结果的假阳性；优化M9培养基，降低沉淀对筛选的干扰，并在负筛流程中加入EGT结构类似物和EGT合成必需氨基酸，去除了响应EGT结构类似物的菌株，进一步提高筛选得到的核糖开关的特异性。
一种麦角核糖开关筛选方法

[发明专利]一种基于CRISPR-Cas9的麦角硫因生物合成方法及应用-CN202210215337.9有效
发明人：张山;丁利平;甘淼;陈永丽 -专利权人： 深圳中科欣扬生物科技有限公司
申请日： 2022-03-07 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9的麦角硫因生物合成方法及应用，属于基因工程领域。本发通过在谷氨酸棒状杆菌中敲除了非必需蛋白肽聚糖内切酶、述胞内蛋白酶、谷氨酸‑胱氨酸连接酶的编码基因，并整合了egt12基因簇，使得重组谷氨酸棒状杆菌具有更好的适应性并具备更好的麦角硫因生产能力。本发明构建的基因工程菌在50L发酵罐条件下30℃发酵56h，麦角硫因产量高达5.47g/L。将有助于麦角硫因的工业化生产。
一种基于 crispr cas9 麦角生物合成方法应用

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