本申请提出了一种基因敲除选育fkbp10a基因缺失型斑马鱼的方法，涉及基因敲除技术领域。根据CRISPR/Cas敲除原理，设计一对fkbp10a基因的靶位点，其中引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：1‑2所示；体外合成sgRNA；将Cas9protein和sgRNA配成混合液，充分混匀，注射混合液于一细胞期的受精卵内；对长大的斑马鱼进行剪尾鉴定，确定了斑马鱼突变体F0代，将F0代突变体分别与野生型斑马鱼杂交得到F1代胚胎，筛选F1代突变体；从F1代突变体中挑选具有相同突变的雌鱼和雄鱼，杂交得到F2代，Sanger测序检验，得到fkbp10a突变体纯合子。其操作简单，脱靶率低。
本发明公开了一种PKM2截短体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过提取肺癌细胞mRNA，逆转录为cDNA，以cDNA为模板，应用PCR技术成功扩增出含345个氨基酸的PKM2截短体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。并将其重组到4.9kb pGEX‑4T‑1载体，经酶切和序列分析证明重组成功后，细胞转染免疫印迹证明多肽的蛋白表达，实现了多肽的重组。为肿瘤治疗开发新的靶点提供实验依据，对于应用于肿瘤的临床治疗具有十分重要的开发应用前景。
本发明公开了一种PPM1G基因靶向的shRNA及其应用，属于生物工程技术领域。PPM1G基因靶向的shRNA是针对PPM1G基因的靶点序列的短发夹RNA，靶点序列如SEQ ID NO.2所示。本发明基于结直肠癌临床治疗面临的难点即治疗后易出现复发转移，提供了一段小干扰片段PPM1G的核酸序列。细胞学实验表明本发明所提供的小干扰RNA具有抑制结直肠癌细胞PPM1G的蛋白表达和抑制癌细胞增殖和迁移侵袭以及增加放疗敏感性的重要功能。因此，本发明为肿瘤治疗开发新的靶点提供了新的技术手段，所提供的PPM1G基因靶向的shRNA对于应用于肿瘤的临床治疗及靶向药物开发具有十分重要的应用价值和前景。
