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[发明专利]32个猕猴桃性状相关分子标记的获得方法及应用-CN202211226708.X在审
发明人：张琼;钟彩虹;汪祖鹏;郑浩 -专利权人：中国科学院武汉植物园
申请日： 2022-10-09 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学及遗传育种技术领域，更具体涉及32个猕猴桃性状相关分子标记的获得方法及应用。本发明首次定位了32个猕猴桃糖、酸、叶绿素和类胡萝卜素含量相关的SNP位点，在常规育种方法中，猕猴桃果实纵径表型鉴定要等到成熟期，浪费大量时间和精力，且选择效率低下，而通过检测与性状连锁的分子标记，可以在苗期进行筛选，不仅节约生产成本而且大大提高选择效率。本发明中猕猴桃性状位点位置明确，分子标记位点的检测方法方便快捷，不受环境影响。
32 猕猴桃性状相关分子标记获得方法应用

[发明专利]快速构建配对sgRNA的Cas9双元表达载体文库的方法-CN201710999410.5有效
发明人：李大卫;汪祖鹏;刘义飞;钟彩虹;黄宏文 -专利权人：中国科学院武汉植物园
申请日： 2017-10-24 - 公布日： 2021-09-03 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速构建配对sgRNA的Cas9双元表达载体文库的方法，涉及基因工程领域中快速构建双元载体的方法。本方法在构建CRISPR‑Cas9双元表达载体基础上，根据特定的基因设计靶标序列设计对应的正反引物，引物具有两个BsaI酶切位点；通过一步PCR得到靶标序列和两个BsaI位点的目的片段，然后通过简单酶切和连接的方式将上述片段构建进入带有Cas9基因的双元表达载体中，形成配对的sgRNA的Cas9载体。本发明能够高效建立随机文库和非随机文库，可以用于植物中基因功能的大规模筛选，同时可以用于多基因间基因互做网络的构建和研究；实验结果证明本方法成功高效地构建了14个靶点（来自14个基因）的随机配对sgRNA的Cas9双元表达载体文库。
快速构建配对 sgrna cas9 表达载体文库方法

[发明专利]用于猕猴桃商业品种的性别鉴定的通用分子标记引物及应用-CN202010136148.3有效
发明人：张琼;钟彩虹;汪祖鹏;郑浩 -专利权人：中国科学院武汉植物园
申请日： 2020-03-02 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开了用于猕猴桃商业品种的性别鉴定的通用分子标记引物及应用，本发明的分子标记引物可用于猕猴桃常见商业栽培品种通用性的性别早期鉴定检测，对中华猕猴桃、美味猕猴桃、大籽猕猴桃、软枣猕猴桃、山梨猕猴桃、毛花猕猴桃和黑蕊猕猴桃均可进行雌雄性别鉴定，避免大量雄株在育种和生产中造成极大的浪费。本分子标记作为通用的猕猴桃性别鉴定标记，用于雌雄性别标记辅助选择，将大大提高育种中雌株的选择效率，缩短育种周期，具有很大的应用潜力和较高的经济价值。
用于猕猴桃商业品种性别鉴定通用分子标记引物应用

[发明专利]一种猕猴桃花粉的溃疡病快速检测方法-CN201911290716.9在审
发明人：李黎;钟彩虹;潘慧;邓蕾;汪祖鹏;张莹华 -专利权人：中国科学院武汉植物园
申请日： 2019-12-16 - 公布日： 2020-03-24 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种猕猴桃花粉的溃疡病快速检测方法，涉及植物病原菌分离及鉴定技术领域。本方法是：①病原菌的分离；②病原菌的培养；③病原菌的菌落PCR检测：A、模板DNA的制备；B、引物序列：SEQ NO.1和SEQ NO.2；C、菌落PCR扩增体系；D、PCR扩增反应程序；E、取PCR扩增产物5μL，用2%琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。本发明实现了中国猕猴桃花粉样本的溃疡病感病情况快速鉴定，具有操作简单、灵敏性高和特异性强等特点，且检测结果准确、客观；适用于快速准确检测猕猴桃花粉是否携带溃疡病菌，将有效降低我国猕猴桃溃疡病感病花粉的传播率，推动猕猴桃科研、育种及生产，具有广阔的应用前景。
一种猕猴桃花粉溃疡快速检测方法

[发明专利]一种基于PTG-Cas9的猕猴桃基因AcPDS编辑载体及其构建方法和应用-CN201710702385.X有效
发明人： 汪祖鹏;刘义飞;黄宏文;李大卫;张琼 -专利权人：中国科学院华南植物园
申请日： 2017-08-16 - 公布日： 2020-03-24 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于PTG‑Cas9的猕猴桃基因AcPDS编辑载体及其构建方法和应用。本发明建立的基于PTG‑Cas9的猕猴桃基因AcPDS编辑载体能够快速简单地对猕猴桃基因进行高效的多靶点定点突变，弥补了猕猴桃中多基因或者多靶点定点编辑技术的空白。实验结果证明：通过农杆菌介导的猕猴桃遗传转化，本发明的基于PTG‑Cas9的猕猴桃基因AcPDS编辑载体成功地对猕猴桃基因AcPDS的四个靶点进行了定点突变，并引起了白化的表型。
一种基于 ptg cas9 猕猴桃基因 acpds 编辑载体及其构建方法应用

[发明专利]一种基于CRISPR-Cas9的猕猴桃基因AcPDS编辑载体及其构建方法和应用-CN201710702395.3有效
发明人： 汪祖鹏;刘义飞;黄宏文;李大卫;张琼 -专利权人：中国科学院华南植物园
申请日： 2017-08-16 - 公布日： 2020-01-14 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9的猕猴桃基因AcPDS编辑载体及其构建方法和应用。本发明建立的基于CRISPR‑Cas9的猕猴桃基因AcPDS编辑载体能够快速简单地对猕猴桃基因进行高效的定点突变，弥补了猕猴桃中基因定点编辑技术的空白。实验结果证明：通过农杆菌介导的猕猴桃遗传转化，本发明的基于CRISPR‑Cas9的猕猴桃基因AcPDS编辑载体成功地对猕猴桃基因AcPDS的两个靶点进行了定点突变，同时引起了白化的表型。
猕猴桃基因定点突变农杆菌介导基因定点遗传转化靶点白化表型构建应用成功

[发明专利]基于CasRx的植物基因沉默载体及其构建方法和应用-CN201910514688.8在审
发明人： 汪祖鹏;钟彩虹 -专利权人：中国科学院武汉植物园
申请日： 2019-06-14 - 公布日： 2019-09-20 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于CasRx的植物基因沉默载体及其构建方法和应用，涉及植物分子生物学领域中的定向基因沉默技术。本植物基因沉默载体是CasRx双元表达载体pHLW‑CasRx；其结构是35S驱动CasRx蛋白表达、AtU6‑26启动子驱动sgRNA表达；其系列是SEQ ID NO.1所示。本发明建立的基于CasRx的植物基因沉默载体能够快速简单特异地对植物基因进行高效的基因沉默，弥补了植物中基于CasRx的高效定向基因沉默系统，同时解决了RNAi技术诸多缺陷；本发明建立的植物基因沉默体系简单、快速、高特异性，能够快速高效高特异性的对植物靶标基因进行表达量敲低和RNA干扰。
植物基因沉默定向基因构建植物分子生物学双元表达载体驱动靶标基因蛋白表达基因沉默植物基因表达量启动子应用