本发明公开了CRISPR/Cas9靶向敲除人细胞SANIL1基因及其特异性sgRNA。首先是获得特异性靶向SANIL1基因外显子的sgRNA,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示;其次是构建SANIL1基因的sgRNA到病毒载体系统,该系统含有Cas9蛋白;最后将含有该sgRNA的CRISPR/Cas9病毒感染人细胞,获得SANIL1蛋白表达水平显著降低的细胞株。本发明具有操作步骤简单、sgRNA靶向性好、且对SANIL1基因切割效率高;此外,所构建的CRISPR/Cas9慢病毒系统具有敲除效率高的优势,并能特异性敲除SANIL1基因,得到敲除SANIL1基因的人细胞,从而为进一步研究人细胞中SANIL1的作用机制提供强有力的工具。
本发明公开了CRISPR/Cas9靶向敲除人肠癌细胞DEAF1基因及其特异性sgRNA。首先是获得特异性靶向DEAF1基因第二外显子的sgRNA,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示;其次是构建DEAF1基因的sgRNA到慢病毒载体系统,该系统含有Cas9蛋白;最后将含有该sgRNA的CRISPR/Cas9慢病毒感染人肠癌HT‑29细胞,获得DEAF1蛋白表达水平显著降低的细胞株。本发明具有操作步骤简单、sgRNA靶向性好、且对DEAF1基因切割效率高;此外,所构建的CRISPR/Cas9慢病毒系统具有敲除效率高的优势,并能特异性敲除DEAF1基因,得到敲除DEAF1基因的人肠癌细胞,从而为进一步研究肠癌细胞中DEAF1的作用机制提供强有力的工具。
本发明公开了CRISPR/Cas9靶向敲除人乳腺癌细胞SLC30A1基因及其特异性sgRNA。首先是获得特异性靶向SLC30A1基因的sgRNA,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示;其次是构建SLC30A1基因的sgRNA到慢病毒载体系统,该系统含有Cas9蛋白;最后将含有该sgRNA的CRISPR/Cas9慢病毒感染人乳腺癌细胞MDA‑MB‑231,获得SLC30A1蛋白表达水平显著降低的细胞株。本发明具有操作步骤简单、sgRNA靶向性好、且对SLC30A1基因切割效率高;此外,所构建的CRISPR/Cas9慢病毒系统具有敲除效率高的优势,并能特异性敲除SLC30A1基因,得到敲除SLC30A1基因的人乳腺癌细胞,从而为进一步研究乳腺癌细胞中SLC30A1的作用机制提供强有力的工具。