本发明涉及农业生物技术领域,尤其涉及一种OsEPSPSpro启动子及其应用。所述OsEPSPSpro启动子包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。本发明经过研究,在OsEPSPS基因中筛选发现了OsEPSPSpro启动子,该启动子可以驱动基因在植物植株中表达;尤其是在植物愈伤组织、营养生长期的叶片,幼穗及种子等各组织中高效稳定的表达,可替代非植物源启动子。本发明提供的OsEPSPSpro启动子在植物的基因工程领域有重要意义,可有效降低外源DNA引起的转基因植物的潜在安全风险。