本发明公开了一种具有广谱裂解活性的抗菌肽P104、裂解酶LysP53及其应用。所述抗菌肽P104的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述抗菌肽P104的基因序列如SEQ ID NO.3所示;所述裂解酶LysP53的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,所述裂解酶LysP53的基因序列如SEQ ID NO.4所示;所述抗菌肽P104和所述裂解酶LysP53在体外对鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌具有较好的裂解效果,能广谱裂解革兰氏阴性菌;同时所述裂解酶LysP53能在大肠杆菌中进行可溶性表达,酶的活性高,因此,所述抗菌肽P104和所述裂解酶LysP53在抗感染类药物的研发中具有较好的应用前景。