本发明公开了基于RAA‑CRISPR‑Cas13a技术检测乙型肝炎病毒DNA的试剂盒。本发明提供了用于检测乙型肝炎病毒DNA的成套引物组，由RAA引物对和crRNA组成；所述RAA引物对根据SEQ ID No.1所示核苷酸序列设计；所述crRNA包括锚定序列和向导序列，所述锚定序列能够与Cas蛋白结合，所述向导序列与所述RAA引物对的扩增产物序列相匹配。本发明采用RAA技术与CRISPR‑Cas13a技术结合方法，通过设计、构建、筛选，最终提供一段用于HBV DNA检测的RAA引物序列及靶向该序列的特异性crRNA，本发明方法简便、快速、具有极高的灵敏度和特异性。灵敏度达到10拷贝/μL。
本发明公开了一种基于PCR‑CRISPR‑Cas13a检测乙型肝炎病毒前基因组RNA的试剂盒。本发明提供了核酸分子组合物，由引物HR‑RT、引物F、引物R和特异crRNA组成；引物HR‑RT为SEQ ID No.1所示的单链DNA分子；引物F为SEQ ID No.2所示的单链DNA分子；引物R为SEQ ID No.3所示的单链DNA分子；特异crRNA为SEQ IDNo.4所示的单链RNA分子。本发明还保护一种检测乙型肝炎病毒的方法：(1)提取受试者血液样本的总RNA，采用引物HR‑RT进行逆转录，得到cDNA；(2)采用引物F和引物R组成的引物对进行PCR扩增；(3)采用特异crRNA进行基于CRISPR‑Cas13a系统的可视化检测。本发明具有非常重要的临床应用前景和开发价值。
