本发明提供了一种用于多重PCR‑反向斑点杂交技术检测肠道病原体的探针,包括十三种氨基标记特异性杂交探针,碱基序列如SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:13所示,且各探针的5’端均标记有氨基。本发明提供了一种用于多重PCR‑反向斑点杂交技术检测肠道病原体的引物,序列分别如SEQ ID NO:16~SEQ ID NO:23所示,5’端均标记有生物素。本发明还提供了一种用于多重PCR‑反向斑点杂交技术检测肠道病原体的试剂以及基于多重PCR‑反向斑点杂交技术检测肠道病原体的方法。本发明的优点在于:具备快速、便捷、成本低以及适应性强等特点,可不依赖细菌培养即可同时鉴定十三种腹泻病原体。
本发明提供了一种用于PCR‑反向斑点杂交技术检测血流感染真菌病原体的探针,包括十三种氨基标记特异性杂交探针,序列如SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:13所示,且5’端标记有氨基。本发明提供了一种用于PCR‑反向斑点杂交技术检测血流感染真菌病原体的引物,包括通用‑F和通用‑R,序列分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17所示,且5’端分别标记有生物素。本发明还提供了一种PCR‑反向斑点杂交技术检测血流感染真菌病原体的试剂以及基于PCR‑反向斑点杂交技术检测真菌病原体的方法。本发明可实现十三种真菌病原体的快速、准确检测,适用于真菌血流感染患者的早期便捷式诊断。
本发明提供了一种用于幽门螺杆菌及毒力基因检测的CrRNA,包括分别针对16S rDNA、cagA、vacA基因的三种CrRNA,序列分别如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.3所示;所述三种CrRNA识别并结合到经RPA扩增的样本序列后,激活Cas12a蛋白切割靶序列,同时切割反应体系内的任一单链DNA。本发明还提供了一种CRISPR‑Cas12a系统以及基于快速检测幽门螺杆菌及毒力基因的方法。同时,本发明还提供了一种CRISPR‑Cas12a系统在制备幽门螺杆菌及毒力基因检测试剂盒中的应用。本发明的优点在于:适用于各种医疗条件下对幽门螺杆菌感染患者进行毒力基因分型的快速便捷式诊断。
本发明提供了一种用于猴痘病毒检测的CrRNA,包括Cas12a‑crRNA和Cas13a‑crRNA;所述Cas12a‑crRNA的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,用于猴痘病毒F3L基因的特异性检测;所述Cas13a‑crRNA的碱基序列如SEQ ID NO.2所示,用于猴痘病毒B6R基因的特异性检测。本发明还提供了一种CRISPR‑Cas系统以及基于CRISPR快速检测猴痘病毒的方法。同时,本发明还提供了一种CRISPR‑Cas系统在制备猴痘病毒检测试剂盒中的应用。本发明的优点在于:适用于各种医疗条件下对猴痘病毒感染患者进行快速便捷式诊断。
本发明涉及医疗技术领域,提供了一种用于新型布尼亚病毒检测的CrRNA,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示,用于引导Cas12a蛋白结合至LAMP扩增产物并反式切割,从而实现病毒疾病的早期检测。本发明还提供了一种CRISPR‑Cas12a系统以及基于CRISPR‑Cas12a快速检测新型布尼亚病毒的方法。同时,本发明还提供了一种CRISPR‑Cas12a系统在制备新型布尼亚病毒检测试剂盒中的应用。本发明的优点在于:快速、便捷、适用性强,可以在医疗资源匮乏的地区实现,不依赖于大型仪器设备如PCR仪等,且耗时短,灵敏度高,成本低,对操作人员技术要求低,可在各种场所应用。
本发明涉及医疗技术领域,提供了一种用于碳青霉烯酶检测的CrRNA,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。所述CrRNA用于引导Cas12a蛋白识别并结合到经LAMP扩增的序列上以切割靶序列,同时,Cas12a蛋白反式切割反应体系内的任一单链DNA。本发明还提供了一种CRISPR‑Cas12a系统以及基于CRISPR‑Cas12a快速检测碳青霉烯酶的方法。同时,本发明还提供了一种CRISPR‑Cas12a系统在制备碳青霉烯酶检测试剂盒中的应用。本发明可作为临床大规模检测人群的方法,且相对传统诊断检测方式,本发明检测方式既大大地缩短了检测时间,也不需要反复训练的操作人员,同时秏价低。
本发明涉及医疗技术领域,提供了一种卡氏肺孢子菌重组蛋白,其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供了一种上述卡氏肺孢子菌重组蛋白的制备方法,包括如下步骤:肺孢子菌动物模型的建立及DNA的提取,引物设计及PCR扩增,目的基因片段的纯化,目的基因片段与克隆载体的连接、转化、鉴定,目的基因片段与表达载体的连接、转化、鉴定,目的蛋白的诱导表达,目的蛋白的SDS‑PAGE鉴定,目的蛋白的纯化。同时,本发明还提供了三种上述卡氏肺孢子菌重组蛋白的应用。本发明的优点在于:本发明卡氏肺孢子菌重组蛋白可用于肺孢子菌感染的早期检测,用于制备预防疫苗,或者,作为药物用于减轻肺孢子菌感染带来的临床症状。