本发明涉及一种可在乳酸乳球菌表面展示表达异源基因的载体及其制备方法与应用。该载体具有序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列,含启动子Pnis、lysM基因、分泌信号肽序列ssusp45、多克隆酶切位点、复制子repA和repC元件。该载体的构建方法:应用PCR技术扩增乳酸乳球菌NZ3900菌株自溶素(AcmA)锚定区基因lysM,将lysM与载体pNZ8110经酶切后进行连接,连接产物用于转化E.coli MC1061菌株,阳性转化菌经酶切和测序鉴定后,提取重组质粒,得到本发明提供的表达载体。该载体功能:将外源基因与该载体连接,转入乳酸乳球菌NZ3900中,经乳酸链球菌素(nisin)诱导可实现外源基因的表达和表达蛋白与宿主细胞壁的结合。该载体可用于包括疫苗抗原在内的外源蛋白的表达,具有广泛的应用范围。